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分子实验遇到了瓶颈 求助！
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| 我是做定点突变的 |
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gu03jia
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- 专业: 植物遗传学
4楼2013-12-03 11:22:03
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刚刚做分子实验，有些地方可能操作不当，请大神指教！ 我的载体构建成功了，双酶切的时候载体和目的基因的条带都有，设计引物做定点突变，PCR之后跑胶验证是有很亮的条带的，说明P成功了！ 之后我用DpnI消化酶消化模板，操作是说明书上的：nuclease-free water 32ul/10Xbuffer tango 4ul/DNA 2ul/DpnI 1-4ul不等，之后在37摄氏度消化一个小时，80摄氏度下20min使酶失活，之后把上述50ul消化体系全部加到感受态中冰镇30min,42摄氏度90s热激转化，再在冰上静止5分钟，把转化后的感受态直接加到刷选平板上，过夜之后还是不长菌，求大神给我指导指导！ PS:我怀疑是感受态的原因，但是我的感受态没有做多久，而且做的时候验证了一下是可以用的！ |
2楼2013-12-02 14:36:27
zh10246
铁杆木虫 (文坛精英)
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- 专业: 细胞外基质
3楼2013-12-02 18:54:39
5楼2013-12-15 21:23:56
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