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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助~~噬菌体抗体库的构建
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dongqin725

金虫 (小有名气)

[求助] 求助~~噬菌体抗体库的构建

各位大侠，我在做抗药的噬菌体抗体库，先免疫balb/c小鼠，然后取其脾脏提取RNA，RNA反转录到cDNA第一链，再用cDNA分别扩增重链可变区和轻链可变区基因，所用的引物是《重组抗体》（沈倍奋等 著）里的用于扩增鼠源scFv单链抗体基因的引物，但是一直PCP不出来，求大神指点！！！十分感谢！！！
引物序列如下：
1)        重链可变区5’端引物
VH1back    5’-AGG TSM ARC TGC AGS AGT CWGG-3’
2)        重链可变区3’端引物
VH1-2for   5’-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC-3’
3)        κ链可变区5’端引物
Vκ2back   5’-GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA -3’
4)        κ链可变区3’端引物
MJκ1for   5’-CCG TTT GAT TTC CAG CTT GGT GCC -3’
MJκ2for   5’-CCG TTT TAT TTC CAG CTT GGT CCC -3’
MJκ4for   5’-CCG TTT TAT TTC CAA CTT TGT CCC -3’
MJκ5for   5’-CCG TTT CAG CTC CAG CTT GGT CCC -3’
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1楼2013-12-02 09:57:33
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紫铃清风li

金虫 (小有名气)

dongqin725

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