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dongqin725金虫 (小有名气)
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[求助]
求助~~噬菌体抗体库的构建
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各位大侠，我在做抗药的噬菌体抗体库，先免疫balb/c小鼠，然后取其脾脏提取RNA，RNA反转录到cDNA第一链，再用cDNA分别扩增重链可变区和轻链可变区基因，所用的引物是《重组抗体》（沈倍奋等 著）里的用于扩增鼠源scFv单链抗体基因的引物，但是一直PCP不出来，求大神指点！！！十分感谢！！！ 引物序列如下： 1) 重链可变区5’端引物 VH1back 5’-AGG TSM ARC TGC AGS AGT CWGG-3’ 2) 重链可变区3’端引物 VH1-2for 5’-TGA GGA GAC GGT GAC CGT GGT CCC TTG GCC CC-3’ 3) κ链可变区5’端引物 Vκ2back 5’-GAC ATT GAG CTC ACC CAG TCT CCA -3’ 4) κ链可变区3’端引物 MJκ1for 5’-CCG TTT GAT TTC CAG CTT GGT GCC -3’ MJκ2for 5’-CCG TTT TAT TTC CAG CTT GGT CCC -3’ MJκ4for 5’-CCG TTT TAT TTC CAA CTT TGT CCC -3’ MJκ5for 5’-CCG TTT CAG CTC CAG CTT GGT CCC -3’ |
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2楼2014-11-10 15:07:30
dongqin725
金虫 (小有名气)
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3楼2014-11-11 17:52:24
100