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liuevans

木虫 (正式写手)

[求助] 线粒体基因组D-loop区遇到高度重复序列,求指点已有1人参与

线粒体基因组D-loop区遇到高度重复序列,无法测通,请高人指点,具体情况如下。

我最初的打算是测一个蛛形纲动物的线粒体基因组,现在基本测完,只剩下D-loop区了,这个片段我设计的引物是在D-loop区侧翼,总长3k,扩增成功,正常双向测序,分别测了一个反应就测不下去了,因为两端重复序列太多,无法设计walking引物,分析已经测通的序列结果,两端都有tandem repeats,估计这就是测不通的原因。据我了解,测序对这种高度串联重复序列很难解决,就算测通也是运气好。所以,求高人指导,希望早日测通,在此谢谢了!
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zhuht1983

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-29 13:09:39
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-29 13:13:45
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2楼2013-11-29 11:03:55
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stoni

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议:首先获得PCR产物;然后,PCR产物进行酶切,变成小片段;克隆小片段;拼接组装。
3楼2014-12-20 15:54:10
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