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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的可重复性
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-03 10:12:16
请问一下，你有没有换新的样品，还是只是用原来的方法重新准备了模板？...

我做的是土壤微生物，是原来的土样，重新提取的DNA
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21楼2013-12-03 12:36:23
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
21楼: Originally posted by lhf903 at 2013-12-03 12:36:23
我做的是土壤微生物，是原来的土样，重新提取的DNA...

我昨天重新做了一批PCR，还是以前的模板，药品也没换，竟然出来了大部分~~~
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22楼2013-12-06 08:42:58
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-06 08:42:58
我昨天重新做了一批PCR，还是以前的模板，药品也没换，竟然出来了大部分~~~...

PCR有时就是这样，祝你好运~
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23楼2013-12-06 11:18:53
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xuchli

铜虫 (正式写手)
PCR有时候确实很莫明其妙
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24楼2013-12-26 21:58:53
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:21:51
顺便问下，你检测的胶最下面的引物二聚体亮吗？？如果很亮的话建议少加点引物，最好做个温度梯度PCR，来个+-10度的，每个梯度P一管看看。
你的模板只稀释处理过吗？你的体系里模板加多少？？建议你不要稀释模板，反而应该加大模板的量。PCR的预变性时间稍微延长一些。
你PCR产物里有非特异性条带没，如果没有，退火时间、延伸时间都做延长处理。如果你的延伸时间原来2min，现在延长到4min,扩增循环到30，先不管杂带不杂带，先保证有带再说。~
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大家相互帮助哈
25楼2013-12-27 00:10:29
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achonghello

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

哈哈哈，跟我一样，之前我师兄还调侃说是不是要靠运气，但是每次换了新的模板，就可以啦。。。祝顺利！！！
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26楼2013-12-27 09:57:17
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nuliwangyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-01-29 16:22:01
引用回帖:
9楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:52:37
对，模板是gDNA，先说一下PCR重复的问题就是之前能够成功扩增的，这应该能说明引物没有问题吧。现在同样的条件就是无法扩增，换过高保真酶，也无济于事。一开始考虑了模板降解问题，也重新提过DNA，都不行。
再就 ...

第一个问题：我觉得您的模板可能已经讲解掉了，或者溶解引物出现问题。您方便上传下电泳图片吗？之前的和现在的。
第二个问题：如果能去除掉认为操作的原因；有的能扩出来，说明有这个基因；有的扩不出来说明没有这个基因。
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27楼2013-12-27 13:41:01
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vivd娟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR真的很神奇，我只能这么说
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28楼2015-08-06 14:43:59
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