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lhf903

金虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-03 10:12:16
请问一下,你有没有换新的样品,还是只是用原来的方法重新准备了模板?...

我做的是土壤微生物,是原来的土样,重新提取的DNA
21楼2013-12-03 12:36:23
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hospitals

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
21楼: Originally posted by lhf903 at 2013-12-03 12:36:23
我做的是土壤微生物,是原来的土样,重新提取的DNA...

我昨天重新做了一批PCR,还是以前的模板,药品也没换,竟然出来了大部分~~~
22楼2013-12-06 08:42:58
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lhf903

金虫 (正式写手)

引用回帖:
22楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-06 08:42:58
我昨天重新做了一批PCR,还是以前的模板,药品也没换,竟然出来了大部分~~~...

PCR有时就是这样,祝你好运~
23楼2013-12-06 11:18:53
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xuchli

铜虫 (正式写手)

PCR有时候确实很莫明其妙
24楼2013-12-26 21:58:53
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-29 16:21:51
顺便问下,你检测的胶最下面的引物二聚体亮吗??如果很亮的话建议少加点引物,最好做个温度梯度PCR,来个+-10度的,每个梯度P一管看看。
你的模板只稀释处理过吗?你的体系里模板加多少??建议你不要稀释模板,反而应该加大模板的量。PCR的预变性时间稍微延长一些。
你PCR产物里有非特异性条带没,如果没有,退火时间、延伸时间都做延长处理。如果你的延伸时间原来2min,现在延长到4min,扩增循环到30,先不管杂带不杂带,先保证有带再说。~
大家相互帮助哈
25楼2013-12-27 00:10:29
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achonghello

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

哈哈哈,跟我一样,之前我师兄还调侃说是不是要靠运气,但是每次换了新的模板,就可以啦。。。祝顺利!!!
26楼2013-12-27 09:57:17
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nuliwangyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-01-29 16:22:01
引用回帖:
9楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:52:37
对,模板是gDNA,先说一下PCR重复的问题就是之前能够成功扩增的,这应该能说明引物没有问题吧。现在同样的条件就是无法扩增,换过高保真酶,也无济于事。一开始考虑了模板降解问题,也重新提过DNA,都不行。
再就 ...

第一个问题:我觉得您的模板可能已经讲解掉了,或者溶解引物出现问题。您方便上传下电泳图片吗?之前的和现在的。
第二个问题:如果能去除掉认为操作的原因;有的能扩出来,说明有这个基因;有的扩不出来说明没有这个基因。
27楼2013-12-27 13:41:01
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vivd娟

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

PCR真的很神奇,我只能这么说
28楼2015-08-06 14:43:59
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