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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的可重复性
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-29 19:36:35
换模板试一下说不定就行了

嗯，重提过模板，我一开始用了国内的试剂盒，后来也尝试过传统酚氯仿法提过，也换过QiaGen的试剂盒，所以我这里有一堆模板
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11楼2013-12-01 21:58:31
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-11-29 20:27:05
最好是全部换新后再做下，不要一次更换一种成份
有问题联系！

谢谢你的意见，样品比较珍贵，不可能重新采样了，所以模板就是重新提，一开始用PCR mix，后来全换了TAKARA的试剂，还用过高保真酶。俗话说PCR是有偶然性的，但是在我这里就是每次都偶尔。
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12楼2013-12-01 22:01:33
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
引用回帖:
10楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:55:21
试过了，也不行不通，之前做了这么多实验，第一次这么有挫败感...

常在河边走 哪能不湿鞋啊
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海纳百川止于至善
13楼2013-12-01 22:15:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-06 14:38:05
引用回帖:
9楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:52:37
对，模板是gDNA，先说一下PCR重复的问题就是之前能够成功扩增的，这应该能说明引物没有问题吧。现在同样的条件就是无法扩增，换过高保真酶，也无济于事。一开始考虑了模板降解问题，也重新提过DNA，都不行。
再就 ...

在提取DNA的过程中，模板多少会有一些损伤，用于PCR模板的gDNA的质量要求不是很严格，所以一般提取的DNA都可以做PCR。同一样品有的基因可以P出来有的却不行也算是正常现象。对于不能P出来的基因，可能是损伤比较严重，稍微多加一点模板试试。在冰箱里放置的模板的确会随时间质量变差，一般就是对放久了的样品稍微多用一点模板，实在不行再重新提。
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14楼2013-12-02 03:41:21
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laojiu9878

至尊木虫 (文坛精英)

九牛

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换个其他人帮助做做，有时怪，换个人就好了
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但愿人长久
15楼2013-12-02 08:22:24
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lhf903 at 2013-11-30 11:45:13
我实验刚刚结束，我也遇到过类似的情况，到最后发现通常都是模板问题~

谢谢你的回复，你最后是重新准备模板，然后问题就解决了吗？
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16楼2013-12-02 08:50:44
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by laojiu9878 at 2013-12-02 08:22:24
换个其他人帮助做做，有时怪，换个人就好了

谢谢你的建议
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17楼2013-12-02 08:59:08
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hospitals

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-11-30 11:12:46
我只能说PCR 很神奇，你的问题，我会考虑重新准备模板，因为这个出问题的可能性最大

谢谢你的建议，我是越来越对“PCR很神奇”这句话深有体会的，模板问题我也考虑过，我一开始用了国内的试剂盒，后来也尝试过传统酚氯仿法提过，也换过QiaGen的试剂盒，所以我这里有一堆模板
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18楼2013-12-02 09:09:20
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lhf903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
16楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-02 08:50:44
谢谢你的回复，你最后是重新准备模板，然后问题就解决了吗？...

是的
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19楼2013-12-02 17:05:17
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by lhf903 at 2013-12-02 17:05:17
是的...

请问一下，你有没有换新的样品，还是只是用原来的方法重新准备了模板？
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20楼2013-12-03 10:12:16
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