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新虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-29 19:36:35
换模板试一下说不定就行了

嗯，重提过模板，我一开始用了国内的试剂盒，后来也尝试过传统酚氯仿法提过，也换过QiaGen的试剂盒，所以我这里有一堆模板

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11楼2013-12-01 21:58:31

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5楼: Originally posted by woshishui916 at 2013-11-29 20:27:05
最好是全部换新后再做下，不要一次更换一种成份
有问题联系！

谢谢你的意见，样品比较珍贵，不可能重新采样了，所以模板就是重新提，一开始用PCR mix，后来全换了TAKARA的试剂，还用过高保真酶。俗话说PCR是有偶然性的，但是在我这里就是每次都偶尔。

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12楼2013-12-01 22:01:33

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1949stone

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海纳百川

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10楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:55:21
试过了，也不行不通，之前做了这么多实验，第一次这么有挫败感...

常在河边走哪能不湿鞋啊

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海纳百川止于至善

13楼2013-12-01 22:15:14

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cicelyzh

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9楼: Originally posted by hospitals at 2013-12-01 21:52:37
对，模板是gDNA，先说一下PCR重复的问题就是之前能够成功扩增的，这应该能说明引物没有问题吧。现在同样的条件就是无法扩增，换过高保真酶，也无济于事。一开始考虑了模板降解问题，也重新提过DNA，都不行。
再就 ...

在提取DNA的过程中，模板多少会有一些损伤，用于PCR模板的gDNA的质量要求不是很严格，所以一般提取的DNA都可以做PCR。同一样品有的基因可以P出来有的却不行也算是正常现象。对于不能P出来的基因，可能是损伤比较严重，稍微多加一点模板试试。在冰箱里放置的模板的确会随时间质量变差，一般就是对放久了的样品稍微多用一点模板，实在不行再重新提。

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14楼2013-12-02 03:41:21

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