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新虫 (初入文坛)

[求助] PCR的可重复性 已有4人参与

最近,做实验出现了特别诡异的事件,之前PCR扩增很是顺利,中间出差一周后再换了新溶的引物,就怎么也扩不出来了。
这期间,DNA检测没有问题,浓度在27-30ng/ul之间,260/280值在1.7-1.9之间;稀释了DNA到10倍,50倍,100倍;引物是新的,别人也试过,引物没有问题;PCRmix也是新的,也换过牌子;换过PCR仪;换过操作的人.......
真是百思不得其解啊,望高人指点迷津啊,不甚感激!

此外,我在N篇文献上找到别人扩增的引物和PCR条件,引物都是通用的,结果用到自己的实验上就总是没有结果,实验一再的在重复重复,无望中~~~
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新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by liyongliangx at 2013-11-30 11:12:46
我只能说PCR 很神奇,你的问题,我会考虑重新准备模板,因为这个出问题的可能性最大

谢谢你的建议,我是越来越对“PCR很神奇”这句话深有体会的,模板问题我也考虑过,我一开始用了国内的试剂盒,后来也尝试过传统酚氯仿法提过,也换过QiaGen的试剂盒,所以我这里有一堆模板
18楼2013-12-02 09:09:20
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查看全部 28 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-30 22:32:33
模板是什么,gDNA?如何确定引物没有问题的?
文献上的PCR条件只能作为自己实验的参考,不要严格follow。PCR的条件在使用不同酶时会有少许差别。
2楼2013-11-29 14:23:21
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-30 22:32:38
我感觉一般的重复性是很好的 论坛里很多人重复自己以前的实验出了问题 还是自身找原因 试剂 样品 仪器
实在不行 去其他实验室做一下试试
海纳百川止于至善
3楼2013-11-29 15:08:07
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不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换模板试一下说不定就行了
借你一生好不好
4楼2013-11-29 19:36:35
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