24小时热门版块排行榜    

查看: 1792  |  回复: 13

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] RT-qPCR

昨天做了一次荧光定量PCR,附件是扩增曲线以及溶解曲线。现在有几个问题想请教,内标的Ct值在8-9左右,可用吗?溶解曲线的高度代表什么?同时请结合附件图片对实验结果进行分析,谢谢!
RT-qPCR
Amplification Plot.jpg


RT-qPCR-1
Melt Curve.jpg
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
joan198108: 金币+1 2013-11-20 08:27:35
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-20 12:26:37
内标太高了吧,稀释一下
2楼2013-11-19 18:37:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnacomputer

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
joan198108: 金币+2, 有帮助 2013-11-25 09:51:24
溶解曲线峰的高度就是荧光强度,与在特定温度下解链的DNA分子数目正相关。
6楼2013-11-25 09:23:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-19 18:37:41
内标太高了吧,稀释一下

内标Ct偏低,但是目的基因Ct值在合理范围之内,稀释后可能导致目的基因的Ct值太高
3楼2013-11-20 08:27:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfeier

金虫 (小有名气)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-21 01:30:13
溶解曲线代表是不是特异性扩增,溶解曲线正常了,才有判断的意义。个人认为。
4楼2013-11-20 21:19:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yanfeier at 2013-11-20 21:19:58
溶解曲线代表是不是特异性扩增,溶解曲线正常了,才有判断的意义。个人认为。

是的,溶解曲线峰的单一性代表扩增的特异性,我想知道峰的高度代表什么
5楼2013-11-21 08:09:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

showman1989

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


joan198108: 金币+1 2013-11-26 08:21:35
内参需要稀释一定的倍数
广交天下有才之士!绝不虚度人生。
7楼2013-11-25 09:51:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


joan198108: 金币+1 2013-11-26 08:21:51
内参的ct也应该在18-28之间。ct太低了刚几个循环就到达荧光阈值了,那你目的基因不在这个范围内怎么比较呢
应助之星就是我~没错。你没有看错~
8楼2013-11-25 15:55:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
joan198108: 金币+2, 有帮助 2013-11-26 08:23:04
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-26 15:27:42
熔解曲线高度应该不影响判断吧,就是荧光强度呗。可能你有的DNA多,有的少,所以就出来的不一样。

但峰位置一致。只要是一个峰就说明扩增得比较纯,没有非特异性扩增,定量的数据有效。
9楼2013-11-25 23:33:46
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joan198108

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by showman1989 at 2013-11-25 09:51:44
内参需要稀释一定的倍数

你是说只在扩增内参的时候实习模板?
10楼2013-11-26 08:21:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 joan198108 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +17 Lanmanbaby 2026-08-09 29/1450 2026-08-12 00:24 by zhanghaozhu
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] filecode +9 documentary 2026-08-10 9/450 2026-08-11 10:08 by wk7465
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +3 majunge000 2026-08-10 3/150 2026-08-10 15:46 by lch2012
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
请填处理意见