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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖凝胶电泳怪现象
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳怪现象

求助：我用分子量为4000bp左右的质粒跑琼脂糖电泳，点的marker为2000的，每次跑胶的结果中4000bp的目的条带与marker中2000的条带的距离有时近有时远，距离不定，请问这是为什么啊？
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
1楼 2013-11-15 12:48:19
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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 冰梓漠 at 2013-11-19 09:43:45
看你的质粒图，有可能你做酶切的时候，只是切开了一个位点，你看一下你的两个内切酶还有它们的通用buffer是否合适。若你时间宽裕，最不济的方法就是你回收一下做一下连接，看能否成功，有时候你提取质粒时缓冲液或水 ...

我用的是EcoRI和XbaI，buffer为10×M。而且，我有做连接-抹板-挑单克隆-1、提质粒-双酶切-电泳；2、菌落PCR-电泳。但都没有目的条带。我不知道原因出在哪，酶是新买的，质粒是公司合成的
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深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
18楼2013-11-19 10:32:46
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bolysu

禁虫 (著名写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-11-15 16:27:18
本帖内容被屏蔽
2楼2013-11-15 13:44:24
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-11-15 16:10:58
tiankong很蓝: 金币+5, ★有帮助 2013-11-18 16:53:47
首先你的质粒有没有做过酶切，没有的话由于不同的分子构型，可能会不能体现真正的分子量大小，第二，选用适合的marker，才能正确体现分子量的大小，每次行胶的条件不一致，必然看起来每次不同
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3楼2013-11-15 15:15:43
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-15 16:27:24
质粒提取后没有酶切的话，应该有三条条带。如果只有一条那就不对。另外，电泳过程中胶的质量不同和电泳电压等条件都会出现条带距离不定的现象。
赞一下(1人) 回复此楼
我不会！
4楼2013-11-15 16:24:58
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