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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 农林 » 农林综合 » 乙酰胆碱酯酶活性测定求助
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once1015

木虫 (正式写手)

[求助] 乙酰胆碱酯酶活性测定求助 已有1人参与

我现在重组表达了果蝇的乙酰胆碱酯酶，但是不知道是否有活性。现在购买了Acetylthiocholine iodide 和DTNB, 并准备用分光光度计来测量。请问，这个反应是否进行的很快，我在测吸光度的时候 先加DTNB还是 底物呢？

因为DTNB本来就是黄色的，请问如果有活性，是否有我能看到的颜色变化？（是黄色变为其他颜色 还是黄色加深？）

谢谢
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1楼 2013-11-07 17:11:43
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928818905

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by once1015 at 2013-11-10 12:21:03
谢谢你的回复。

如果是这样的话 我的酶还是有活性的，请问如何才能准确的确定酶活呢？也是通过吸光系数计算的吗？ 貌似不是很准确啊...

不好意思，刚看到您的回复。酶活性大小的是单位时间待测液吸光度的变化值。酶活越高，单位时间内与显色剂生成的有色物越多，也就是颜色从无色到黄色的变化越快！
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once1015
4楼2013-12-24 14:17:47
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928818905

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
once1015: 金币+5, ★★★很有帮助, 很有帮助 2013-11-10 12:19:59
当然先加DTNB显色剂了，在37°左右放置一段时间，然后加底物。虽然DTNB有颜色，但一般加的都是小量，不会对体系的的颜色产生影响，所以可以通过观察颜色变化来定性判断。颜色越黄说明活性越大。
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2楼2013-11-09 14:40:21
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once1015

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 928818905 at 2013-11-09 14:40:21
当然先加DTNB显色剂了，在37°左右放置一段时间，然后加底物。虽然DTNB有颜色，但一般加的都是小量，不会对体系的的颜色产生影响，所以可以通过观察颜色变化来定性判断。颜色越黄说明活性越大。

谢谢你的回复。

如果是这样的话 我的酶还是有活性的，请问如何才能准确的确定酶活呢？也是通过吸光系数计算的吗？ 貌似不是很准确啊
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3楼2013-11-10 12:21:03
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once1015

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 928818905 at 2013-12-24 14:17:47
不好意思，刚看到您的回复。酶活性大小的是单位时间待测液吸光度的变化值。酶活越高，单位时间内与显色剂生成的有色物越多，也就是颜色从无色到黄色的变化越快！...

谢谢了 请问你有具体测ACHE活性的文献吗？ 能否给个文献的名字 ？ 我想知道具体的计算方法
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5楼2014-04-03 14:26:29
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