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once1015

木虫 (正式写手)

[求助] 乙酰胆碱酯酶活性测定求助 已有1人参与

我现在重组表达了果蝇的乙酰胆碱酯酶,但是不知道是否有活性。现在购买了Acetylthiocholine iodide 和DTNB, 并准备用分光光度计来测量。请问,这个反应是否进行的很快,我在测吸光度的时候 先加DTNB还是 底物呢?

因为DTNB本来就是黄色的,请问如果有活性,是否有我能看到的颜色变化?(是黄色变为其他颜色 还是黄色加深?)

谢谢
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once1015

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 928818905 at 2013-11-09 14:40:21
当然先加DTNB显色剂了,在37°左右放置一段时间,然后加底物。虽然DTNB有颜色,但一般加的都是小量,不会对体系的的颜色产生影响,所以可以通过观察颜色变化来定性判断。颜色越黄说明活性越大。

谢谢你的回复。

如果是这样的话 我的酶还是有活性的,请问如何才能准确的确定酶活呢?也是通过吸光系数计算的吗? 貌似不是很准确啊
3楼2013-11-10 12:21:03
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928818905

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
once1015: 金币+5, ★★★很有帮助, 很有帮助 2013-11-10 12:19:59
当然先加DTNB显色剂了,在37°左右放置一段时间,然后加底物。虽然DTNB有颜色,但一般加的都是小量,不会对体系的的颜色产生影响,所以可以通过观察颜色变化来定性判断。颜色越黄说明活性越大。
2楼2013-11-09 14:40:21
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928818905

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by once1015 at 2013-11-10 12:21:03
谢谢你的回复。

如果是这样的话 我的酶还是有活性的,请问如何才能准确的确定酶活呢?也是通过吸光系数计算的吗? 貌似不是很准确啊...

不好意思,刚看到您的回复。酶活性大小的是单位时间待测液吸光度的变化值。酶活越高,单位时间内与显色剂生成的有色物越多,也就是颜色从无色到黄色的变化越快!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-12-24 14:17:47
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once1015

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 928818905 at 2013-12-24 14:17:47
不好意思,刚看到您的回复。酶活性大小的是单位时间待测液吸光度的变化值。酶活越高,单位时间内与显色剂生成的有色物越多,也就是颜色从无色到黄色的变化越快!...

谢谢了 请问你有具体测ACHE活性的文献吗? 能否给个文献的名字 ? 我想知道具体的计算方法
5楼2014-04-03 14:26:29
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