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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 10%SDS溶液沉淀，怎么破！！！
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sweleon

新虫 (初入文坛)

[求助] 10%SDS溶液沉淀，怎么破！！！

为了抽提质粒，配置了10%的SDS，但是室温条件下（20摄氏度）会出现严重的结晶沉淀，请问这个是什么原因。
ph未调整至7.2。
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1楼 2013-11-03 13:33:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

fangfang_

铜虫 (初入文坛)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你更多精彩 2013-11-03 17:25:54
温度太低是可能会导致结晶沉淀，这是经常遇到的现象，用之前在37度或者温度稍微高的水浴锅预热一下，就会变澄清，没有完全澄清也不太会影响你的质粒提取，只要溶液2加进去菌液裂解变澄清了就OK
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2楼2013-11-03 13:56:10
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:26:09
37度水浴，用完速盖好。

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应助之星就是我~没错。你没有看错~
3楼2013-11-03 14:36:11
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:26:34
提质粒用不到sds纳？？？？

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应助之星就是我~没错。你没有看错~
5楼2013-11-03 14:41:26
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普通回帖

沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-11-03 17:26:22
温柔颠倒避免起泡，急用就拿个烧杯装开水水浴

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应助之星就是我~没错。你没有看错~
4楼2013-11-03 14:40:28
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
哦，手工法二液

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应助之星就是我~没错。你没有看错~
6楼2013-11-03 14:42:29
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sweleon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-11-03 14:41:26
提质粒用不到sds纳？？？？

用了，就是SDS钠盐啊。十二烷基磺酸钠！
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7楼2013-11-04 19:06:40
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sweleon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fangfang_ at 2013-11-03 13:56:10
温度太低是可能会导致结晶沉淀，这是经常遇到的现象，用之前在37度或者温度稍微高的水浴锅预热一下，就会变澄清，没有完全澄清也不太会影响你的质粒提取，只要溶液2加进去菌液裂解变澄清了就OK

我遇到的问题是TG1的菌，同样的菌量，能变得很透亮，但是DH5α的菌，加多少溶液2都没用，看起来还是混混的，不是很澄清那种，但比原来的菌液要透亮很多。不知道为什么，而且提完后的结果RNA含量超级高，质粒没几个。
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8楼2013-11-04 19:09:10
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sweleon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fangfang_ at 2013-11-03 13:56:10
温度太低是可能会导致结晶沉淀，这是经常遇到的现象，用之前在37度或者温度稍微高的水浴锅预热一下，就会变澄清，没有完全澄清也不太会影响你的质粒提取，只要溶液2加进去菌液裂解变澄清了就OK

可我是室温20度就沉淀结晶很多，液体基本都没有，全部成固体了。SDS是阿拉丁牌子的试剂。
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9楼2013-11-04 19:14:44
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-05 11:50:51
引用回帖:
8楼: Originally posted by sweleon at 2013-11-04 19:09:10
我遇到的问题是TG1的菌，同样的菌量，能变得很透亮，但是DH5α的菌，加多少溶液2都没用，看起来还是混混的，不是很澄清那种，但比原来的菌液要透亮很多。不知道为什么，而且提完后的结果RNA含量超级高，质粒没几个 ...

top 10，dh5α还算好的。。关键看是什么样的菌。质粒是高拷贝还是低拷贝。另外手法也很重要。不同菌，不同拷贝数的质粒。差异很大。低拷贝的质粒想提的好需要加倍菌液。用的1液也要加倍，才好裂解。2液3液都是浮云。另外还遇到过某菌用一液破菌效果得率都很低的情况。应该是菌体富含的成分影响提取。例如核酸酶丰富的菌种，在试剂盒提低拷贝时会提示用核酸酶抑制剂加强得率。
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
10楼2013-11-04 20:00:01
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