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Allen206

银虫 (小有名气)

[求助] 难做的蛋白 已有1人参与

大家好,最近做一个蛋白,过了NI柱和离子柱子还不纯啊,大家有什么好办法没?平时大家遇到这种情况都怎么办啊?过疏水么?分子筛不行,有条杂带距离很近,求大家不吝赐教啊
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不想说什么,,,,
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最讨厌使用Ni柱了,专一性比较差,可以自己制备Cu柱,专一性会好很多,另外,离子柱是我的最爱,基本绝大多数蛋白质均可以搞定。
7楼2014-03-19 08:51:24
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-29 19:49:13
过阴离子,然后阳离子,或者相反,微调pH值,当然有疏水柱当然更好了,如果杂带比你要的蛋白小的话,有可能是目的蛋白降解的产物,如果大的话,可能是翻译后修饰,想一下,好多可能性啊。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2013-10-29 18:46:32
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Allen206

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-29 18:46:32
过阴离子,然后阳离子,或者相反,微调pH值,当然有疏水柱当然更好了,如果杂带比你要的蛋白小的话,有可能是目的蛋白降解的产物,如果大的话,可能是翻译后修饰,想一下,好多可能性啊。

请问大虾,我的目标等电点8.5,缓冲液不能比这个再高了吧?
不想说什么,,,,
3楼2013-10-29 21:42:32
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-30 00:10:50
1. N端C端各一个标签,用Ni柱纯化以后换另一个标签再纯化一遍.
2. 过制备级的HPLC
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-30 00:07:32
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