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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 难做的蛋白
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Allen206

银虫 (小有名气)

[求助] 难做的蛋白 已有1人参与

大家好，最近做一个蛋白，过了NI柱和离子柱子还不纯啊，大家有什么好办法没？平时大家遇到这种情况都怎么办啊？过疏水么？分子筛不行，有条杂带距离很近，求大家不吝赐教啊
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不想说什么，，，，
1楼 2013-10-29 17:25:01
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-29 19:49:13
过阴离子，然后阳离子，或者相反，微调pH值，当然有疏水柱当然更好了，如果杂带比你要的蛋白小的话，有可能是目的蛋白降解的产物，如果大的话，可能是翻译后修饰，想一下，好多可能性啊。
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-10-29 18:46:32
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Allen206

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-29 18:46:32
过阴离子，然后阳离子，或者相反，微调pH值，当然有疏水柱当然更好了，如果杂带比你要的蛋白小的话，有可能是目的蛋白降解的产物，如果大的话，可能是翻译后修饰，想一下，好多可能性啊。

请问大虾，我的目标等电点8.5，缓冲液不能比这个再高了吧？
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不想说什么，，，，
3楼2013-10-29 21:42:32
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:10:50
1. N端C端各一个标签,用Ni柱纯化以后换另一个标签再纯化一遍.
2. 过制备级的HPLC
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-30 00:07:32
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-30 08:58:21
用SP阳离子柱， 缓冲液从8.0，7.5， 7.0试试看，然后盐浓度洗脱的时候，慢一些
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2013-10-30 08:50:12
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wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-10-30 22:18:31
我们实验室做蛋白纯化一般都设计不同的咪唑梯度，例如0,20，40,60,80,100,200,300,500，先分别洗脱，找到最适合的洗脱浓度，然后用那个浓度的咪唑洗脱。效果比较好，杂带少，如果说纯化不了的话，可能使蛋白折叠，把组氨酸标签折叠在里面了，建议换纯化方法，或者换载体，重新表达纯化。
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对于誓言一定要实现。
6楼2013-10-30 19:23:18
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最讨厌使用Ni柱了，专一性比较差，可以自己制备Cu柱，专一性会好很多，另外，离子柱是我的最爱，基本绝大多数蛋白质均可以搞定。
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7楼2014-03-19 08:51:24
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Allen206

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gaolei0529 at 2014-03-19 08:51:24
最讨厌使用Ni柱了，专一性比较差，可以自己制备Cu柱，专一性会好很多，另外，离子柱是我的最爱，基本绝大多数蛋白质均可以搞定。

请问Cu柱是钴么？
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不想说什么，，，，
8楼2014-03-21 14:43:25
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fangyuanpan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Allen206 at 2014-03-21 14:43:25
请问Cu柱是钴么？...

Cu铜，Co钴
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9楼2014-03-21 18:43:53
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Allen206 at 2014-03-21 14:43:25
请问Cu柱是钴么？...

铜
10楼2014-03-22 09:41:01
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