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Allen206

银虫 (小有名气)

[求助] 难做的蛋白 已有1人参与

大家好,最近做一个蛋白,过了NI柱和离子柱子还不纯啊,大家有什么好办法没?平时大家遇到这种情况都怎么办啊?过疏水么?分子筛不行,有条杂带距离很近,求大家不吝赐教啊
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不想说什么,,,,
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-29 19:49:13
过阴离子,然后阳离子,或者相反,微调pH值,当然有疏水柱当然更好了,如果杂带比你要的蛋白小的话,有可能是目的蛋白降解的产物,如果大的话,可能是翻译后修饰,想一下,好多可能性啊。
行至水穷处,坐看云起时
2楼2013-10-29 18:46:32
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Allen206

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-29 18:46:32
过阴离子,然后阳离子,或者相反,微调pH值,当然有疏水柱当然更好了,如果杂带比你要的蛋白小的话,有可能是目的蛋白降解的产物,如果大的话,可能是翻译后修饰,想一下,好多可能性啊。

请问大虾,我的目标等电点8.5,缓冲液不能比这个再高了吧?
不想说什么,,,,
3楼2013-10-29 21:42:32
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-30 00:10:50
1. N端C端各一个标签,用Ni柱纯化以后换另一个标签再纯化一遍.
2. 过制备级的HPLC
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-30 00:07:32
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-30 08:58:21
用SP阳离子柱, 缓冲液从8.0,7.5, 7.0试试看,然后盐浓度洗脱的时候,慢一些
行至水穷处,坐看云起时
5楼2013-10-30 08:50:12
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wcfbio

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2013-10-30 22:18:31
我们实验室做蛋白纯化一般都设计不同的咪唑梯度,例如0,20,40,60,80,100,200,300,500,先分别洗脱,找到最适合的洗脱浓度,然后用那个浓度的咪唑洗脱。效果比较好,杂带少,如果说纯化不了的话,可能使蛋白折叠,把组氨酸标签折叠在里面了,建议换纯化方法,或者换载体,重新表达纯化。
对于誓言一定要实现。
6楼2013-10-30 19:23:18
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

最讨厌使用Ni柱了,专一性比较差,可以自己制备Cu柱,专一性会好很多,另外,离子柱是我的最爱,基本绝大多数蛋白质均可以搞定。
7楼2014-03-19 08:51:24
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Allen206

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by gaolei0529 at 2014-03-19 08:51:24
最讨厌使用Ni柱了,专一性比较差,可以自己制备Cu柱,专一性会好很多,另外,离子柱是我的最爱,基本绝大多数蛋白质均可以搞定。

请问Cu柱是钴么?
不想说什么,,,,
8楼2014-03-21 14:43:25
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fangyuanpan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Allen206 at 2014-03-21 14:43:25
请问Cu柱是钴么?...

Cu铜,Co钴
9楼2014-03-21 18:43:53
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gaolei0529

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by Allen206 at 2014-03-21 14:43:25
请问Cu柱是钴么?...

10楼2014-03-22 09:41:01
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