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邓满凤

新虫 (初入文坛)

[求助] 急需

有哪位大侠做过磁性纳米颗粒固定化漆酶?为什么我将0.1- 0.25%的戊二醛直接加入到1ml0.5mol/ml的漆酶溶液(包含了5mg的氨基化的二氧化硅)中,在冰箱中固定化12个小时后测酶活回收率怎么只有3%?可以帮忙分析下吗
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duruo

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孩儿她爹

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★ ★
邓满凤(markar代发): 金币+2, 感谢回帖交流! 2013-11-01 15:40:51
引用回帖:
5楼: Originally posted by 邓满凤 at 2013-10-31 18:50:45
取6mg氨基活化的磁性二氧化硅纳米颗粒分散到1ml浓度为0.5mg/ml漆酶溶液(用磷酸盐缓冲液配置)中,加入20ul,0.1%的戊二醛,然后将反应混合物置于4℃的恒温摇床上反应13h,其中摇床的转速为150rpm。反应结束时,用 ...

现在看有几个可能:
1、固载酶含量测定有误差,尤其是固载量很低的情况下,误差就会更大;
2、戊二醛本身对酶活性有影响,这里主要是指酶被戊二醛交联,因此导致的活性降低;
3、酶在固定化后,其最佳催化条件可能与游离态不同(比如温度)。

解决方法:
1、提高酶固载量,建议你在偏酸条件下进行反应,有利于希夫碱的形成;
2、在不加磁性纳米粒的情况下,看看戊二醛与酶反应后酶的活力,排除戊二醛交联的影响;
3、优化固定化酶活力检测条件
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
6楼2013-11-01 11:13:56
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duruo

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【答案】应助回帖

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markar: 金币+1, 感谢回帖交流! 2013-11-01 15:40:31
邓满凤(红舟流星代发): 金币+2, 代扣代发金币 2014-03-25 10:52:12
0.5mol/mL ? 笔误吧?
不知道你的操作过程如何

不过将戊二醛直接加入酶的溶液中,应该会造成酶自身的交联,使其失活

先用戊二醛活化二氧化硅,然后加入酶,可能会好些
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
2楼2013-10-29 14:35:21
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邓满凤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duruo at 2013-10-29 14:35:21
0.5mol/mL ? 笔误吧?
不知道你的操作过程如何

不过将戊二醛直接加入酶的溶液中,应该会造成酶自身的交联,使其失活

先用戊二醛活化二氧化硅,然后加入酶,可能会好些

请问0.5mg/ml的酶液不行吗?我试过先用戊二醛活化二氧化硅,然后加入酶,但活性收率太低了
3楼2013-10-29 15:15:56
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duruo

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邓满凤(红舟流星代发): 金币+1, 代扣代发金币 2014-03-25 10:52:19
引用回帖:
3楼: Originally posted by 邓满凤 at 2013-10-29 15:15:56
请问0.5mg/ml的酶液不行吗?我试过先用戊二醛活化二氧化硅,然后加入酶,但活性收率太低了...

呵呵,0.5mg可以,0.5mol就太大了

你是怎么计算活性收率的?最好把整个过程都写出来
能攻心则反侧自消,从古知兵非好战;不审势即宽严皆误,后来治蜀要深思
4楼2013-10-29 15:21:35
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