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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教酶分离纯化的一个问题，请各位虫友帮帮忙
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rananuo1

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教酶分离纯化的一个问题，请各位虫友帮帮忙

各位虫友大家好，请教大家一个问题，还望能得到靠谱的答复：
1. 我现在要做一个把真菌中的一种降解农药的酶分离纯化出来，如果用盐析柱层析然后凝胶电泳检测的话会使酶失活，无法检测。不知道如何在保持酶活性的情况下，对酶进行分离纯化呢？
2. 还有，因为细菌降解农药的酶已经研究的比较透彻，如果采用从细菌当中克隆降解酶同源基因的话，应该怎么做呢？谢谢各位~
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1楼 2013-10-27 11:19:48
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
盐析柱层析？凝胶电泳检测？


没接触过这两个提法，具体是怎么做的？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2013-10-29 21:57:38
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:44:02
1: 一般这样酶的纯化很有可能有文献报道，即使不是这个酶，和这个酶性质接近的酶被纯化的文献也是不难找的，找到后照着做就好了，否则就开始从阴阳离子柱，分子筛等等方式，每一步都检测酶活性，最后总能纯化出你要的蛋白

2：克隆基因不是三言两语就可以说出的，有完整的文献攻略，可以问问师兄师姐，或者分子实验指南
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-10-27 12:11:08
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rananuo1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-27 12:11:08
1: 一般这样酶的纯化很有可能有文献报道，即使不是这个酶，和这个酶性质接近的酶被纯化的文献也是不难找的，找到后照着做就好了，否则就开始从阴阳离子柱，分子筛等等方式，每一步都检测酶活性，最后总能纯化出你要 ...

好的，谢谢~看来我现在还是要多看看文献，然后有问题了再咨询吧~
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3楼2013-10-28 09:18:40
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rananuo1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-29 21:57:38
盐析柱层析？凝胶电泳检测？


没接触过这两个提法，具体是怎么做的？

我还没有开始做，是看有文献是这样做的：硫酸铵盐析沉淀，Sephadex G-100柱层析纯化，DEAG-52柱层析，PAGE电泳检测。。但是这样的话酶不是就失活了啊，而且成功的可能性也较小，我不知道是否有其他解决方法，所以前来小木虫请教了。
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5楼2013-10-30 14:51:31
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