应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教酶分离纯化的一个问题，请各位虫友帮帮忙
51/1返回列表
查看: 1268  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rananuo1

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教酶分离纯化的一个问题，请各位虫友帮帮忙

各位虫友大家好，请教大家一个问题，还望能得到靠谱的答复：
1. 我现在要做一个把真菌中的一种降解农药的酶分离纯化出来，如果用盐析柱层析然后凝胶电泳检测的话会使酶失活，无法检测。不知道如何在保持酶活性的情况下，对酶进行分离纯化呢？
2. 还有，因为细菌降解农药的酶已经研究的比较透彻，如果采用从细菌当中克隆降解酶同源基因的话，应该怎么做呢？谢谢各位~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-27 11:19:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-27 17:44:02
1: 一般这样酶的纯化很有可能有文献报道，即使不是这个酶，和这个酶性质接近的酶被纯化的文献也是不难找的，找到后照着做就好了，否则就开始从阴阳离子柱，分子筛等等方式，每一步都检测酶活性，最后总能纯化出你要的蛋白

2：克隆基因不是三言两语就可以说出的，有完整的文献攻略，可以问问师兄师姐，或者分子实验指南
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-10-27 12:11:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rananuo1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2013-10-27 12:11:08
1: 一般这样酶的纯化很有可能有文献报道，即使不是这个酶，和这个酶性质接近的酶被纯化的文献也是不难找的，找到后照着做就好了，否则就开始从阴阳离子柱，分子筛等等方式，每一步都检测酶活性，最后总能纯化出你要 ...

好的，谢谢~看来我现在还是要多看看文献，然后有问题了再咨询吧~
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-28 09:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
盐析柱层析？凝胶电泳检测？


没接触过这两个提法，具体是怎么做的？
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2013-10-29 21:57:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rananuo1

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2013-10-29 21:57:38
盐析柱层析？凝胶电泳检测？


没接触过这两个提法，具体是怎么做的？

我还没有开始做，是看有文献是这样做的：硫酸铵盐析沉淀，Sephadex G-100柱层析纯化，DEAG-52柱层析，PAGE电泳检测。。但是这样的话酶不是就失活了啊，而且成功的可能性也较小，我不知道是否有其他解决方法，所以前来小木虫请教了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-30 14:51:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rananuo1 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 BnSlaJi8z5Vo 2026-08-17 3/150 2026-08-17 17:38 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +4 angus9576 2026-08-17 8/400 2026-08-17 17:26 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 3/150 2026-08-17 16:35 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 13:49 by EYK67XJMj64E
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 4/200 2026-08-17 11:46 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭