应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药理学 » 同时分离血小板和红细胞
51/1返回列表
查看: 2517  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wangxding

新虫 (小有名气)

[求助] 同时分离血小板和红细胞

本人最近在做关于血小板和红细胞（灌胃给药大鼠的血浆）可能结合成分的研究，所以需要同时分离血小板和红细胞，由于完全是菜鸟，在查阅相关文献时学习到可能可行的两种方法，希望能获得相对纯的血小板和红细胞。下面是我遇到的疑惑，请各位多多指教，谢谢！
1、抗凝剂的选择：有的书上说肝素钠对血小板聚集有影响，如果需要同时分离血小板和红细胞的话，是不是最好选择枸橼酸钠？请教各位最好使用哪种抗凝剂能保持两者的活性。
2、分离方法猜想：a、差速离心：先将抗凝血用900rpm，室温离心1omin，吸取上层PRP，再将PRP以室温3000rpm离心10分钟，使血小板沉淀，将血小板用pH6.5的含EDTA0.2mmol/L的无Ca2+的Trode液洗涤3次，用pH7.4的PBS悬浮。另外，取下层血浆，加入3倍PBS液，3000r/min冷冻离心 10min，，弃上清液，反复洗涤三次，得到红细胞悬液，向红细胞悬液中以 1:80 比例加入预冷的 5mmol/L PH7.4Tris-HCl 溶液，同时加入蛋白酶抑制剂对甲苯磺酰氟（PMSF），之后以 80Hz 20℃超声 15min，放入 4℃溶血过夜，将所得红细胞溶血液以 15000r/min 离心 10min,弃上清液，再加入 5mmol/L PH 7.4Tris-HCl 溶液以 15000r/min 离心 10min，反复洗涤3-5次，最后得到乳白色膜，将其1:1 悬浮在 PBS 溶液中。
b、用密度梯度离心：这部分只做了初步了解，还没有具体方案，希望各位能给些建议。
3、由于实验需要检测的是与血小板和红细胞膜结合的物质，会采用pH4的PBS洗脱血小板和红细胞膜，这种做法是否能够将结合成分洗脱，是否可行？有没有必要使红细胞溶血后得到红细胞膜悬液再洗脱？
4、蛋白酶抑制剂对甲苯磺酰氟（PMSF）加入量应该为多少？
5、在洗涤红细胞膜时有的用Tris-HCL液也有Hank's液，两者哪个更好？
6、在做相关实验时所需要的仪器有哪些？比如是用EP管离心还是其他什么管？
7、刚开始离心时不用冷冻离心是否会对红细胞产生影响？
问题有点多再次多谢大家！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-25 17:51:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RXMCDM

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wangxding: 金币+35 2013-11-27 21:29:15
引用回帖:
9楼: Originally posted by wangxding at 2013-10-28 19:56:15
哦，明白了，不用回输的，除了EDTA有没有对血小板和红细胞都没有影响的抗凝剂呢？虽然我了解到的EDTA应用范围比较广，但是对“含EDTA0.2mmol/L的无Ca2+的Trode液”就不太好定量，您有何高见呢？...

用枸橼酸钠！可以，如果分离所需时间段的话！
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

wangxding
？
10楼2013-10-28 20:02:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答

wangxding

新虫 (小有名气)
诚心求助，望高手雪中送炭哇
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-26 18:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

RXMCDM

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxding: 金币+15, ★有帮助 2013-10-28 19:06:51
如果需要同时分离血小板和红细胞的话，可选用CPD保存液，或EDTA K2,洗涤红细胞膜时用Hank's液，刚开始离心时不用冷冻离心会对红细胞产生影响,分离血小板和红细胞一般不用密度梯度离心！
赞一下 回复此楼
？
4楼2013-10-26 20:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxding

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by RXMCDM at 2013-10-26 20:49:25
如果需要同时分离血小板和红细胞的话，可选用CPD保存液，或EDTA K2,洗涤红细胞膜时用Hank's液，刚开始离心时不用冷冻离心会对红细胞产生影响,分离血小板和红细胞一般不用密度梯度离心！

你说的保存液是抗凝剂吗？如果用EDTA-K2作为抗凝剂的话那洗涤血小板时“含EDTA0.2mmol/L的无Ca2+的Trode液”就不太好定量了，现在我打算先自然沉降分离血小板然后再冷冻离心，这样应该红细胞影响较小了吧，谢谢你的回答！终于等到一个了，不容易！
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-28 19:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 16 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +5 08电气工程 2026-04-03 5/250 2026-04-08 20:22 by 逆水乘风
[考研] 材料专硕调剂 +14 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 15/750 2026-04-08 19:36 by cheerful9622
[考研] 0703调剂，一志愿天津大学319分 +23 haaaabcd 2026-04-05 26/1300 2026-04-08 16:19 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +6 chenxrlkx 2026-04-05 8/400 2026-04-08 16:03 by screening
[考研] 283求调剂 +19 A child 2026-04-04 19/950 2026-04-08 14:26 by xingguangj
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 一志愿北京化工085600 310分求调剂 +20 0856材料与化工3 2026-04-04 22/1100 2026-04-07 15:14 by 上岸快快
[考研] 285求调剂 +15 哦呦呼o 2026-04-04 17/850 2026-04-06 23:02 by chenzhimin
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 工科370求调剂 +3 溏心煎鸡蛋 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:55 by 这是一个无聊的�
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 一志愿华北电力大学（北京），材料科学与工程学硕265，求调剂 +11 yelck 2026-04-03 12/600 2026-04-04 19:52 by dongzh2009
[考研] 怎么删帖子啊 +3 缝曦1000 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:20 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿北交大材料工程总分358 +6 cs0106 2026-04-03 6/300 2026-04-04 11:20 by w_xuqing
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 一志愿双非085502，267分，过四级求调剂 +3 再忙也要吃饭啊 2026-04-03 3/150 2026-04-04 05:03 by gswylq
[考研] 求调剂 +4 15064154688 2026-04-03 5/250 2026-04-03 15:07 by zrongyan
[考研] 295求调剂 +7 愿旅途永远坦然 2026-04-02 7/350 2026-04-03 08:22 by fangshan711
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭