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民爱桥

铜虫 (小有名气)

[求助] WB结果膜总是黑成一片是怎么回事 已有1人参与

做WB整整有一个月了,结果都不好,主要是条带颜色淡,背景颜色深,有时甚至是整个黑成一片,根本看不到条带的影子,很是恼火。有尝试过换封闭液,增加封闭时间,增加洗膜次数,可结果依旧不好。现在的条件是5%的脱脂奶粉(光明),一抗孵育过夜,洗膜(TBST:Nacl 8.8g,1M PH7.5 Tris HCL 20ml,Tween 20 1ml,蒸馏水定容至1L)5min*5次,二抗孵育1h,请教给位大神,我的问题到底出在哪儿,是操作中还是真的是抗体不行呢?
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WB结果膜总是黑成一片是怎么回事
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wodexinqin

铁杆木虫 (著名写手)

为卿痴狂 傻瓜帮帮主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
民爱桥: 金币+5 2013-10-27 09:06:27
民爱桥: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-01-07 09:26:53
你这种情况,如果是化学发光,不把膜上的多余液体除尽就去发光,是会产生这种背景的,在加发光液之前先用吸水纸把膜表面的多余液体吸干,膜放在平整干净透明的载体上,再去发光试试看。
其实我对自己也并不十分了解……
16楼2013-10-26 19:37:54
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