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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB杂交用PBST+0.1%milk洗膜吗?
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骆雷361

银虫 (小有名气)

[求助] WB杂交用PBST+0.1%milk洗膜吗?

WB杂交用PBST+0.1%milk洗膜吗?怕有背景，所以洗膜的PBST里加了Milk，可以否，有人这么做过吗？？？
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“人一辈子有两条路要走，一条是必须走的，一条你是想走的，你必须把必须走的路走漂亮，才可以走想走的路。”------无名
1楼 2013-01-08 10:44:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
洗的时候没人加milk。milk主要用于封闭膜上非特异结合位点。在一抗或者二抗中加是为了保护抗体。洗膜是未了洗去非特异结合在膜上多余的抗体，不知道你在洗膜的时候加milk是干什么用的。
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2楼2013-01-08 13:31:10
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不用加牛奶的，孵育抗体的时候要加。

而且如果你在TBST 洗膜液中 加 牛奶  它很容易变质发臭的 你配的东西 会特别容易长菌 变坏
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3楼2013-01-08 14:44:29
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不能加！你加了后本底会很高的，milk里面的酶会影响你的显色。
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shine
4楼2013-01-08 16:07:22
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骆雷361

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zhang881007 at 2013-01-08 16:07:22
不能加！你加了后本底会很高的，milk里面的酶会影响你的显色。

本底很高？什么本底啊？是胶片背景颜色很黑吗？
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“人一辈子有两条路要走，一条是必须走的，一条你是想走的，你必须把必须走的路走漂亮，才可以走想走的路。”------无名
5楼2013-01-09 10:35:44
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

封闭过后的各步，可以用PBST+0.5-1.0%的BSA，我们是这么做的
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6楼2013-02-01 14:52:15
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