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gyl1990915

铁虫 (初入文坛)

[求助] 脊髓做WB 内参总是不齐

每次用脊髓做WB,内参总是不整齐。求高手解释,定量和上样都没有问题
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beckham27

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
http://muchong.com/html/201103/2946562.html
http://bbs.bbioo.com/thread-96560-1-1.html
http://www.dxy.cn/bbs/topic/19720782
http://www.biomart.cn/experiment/87/question/309.htm
http://www.dxy.cn/bbs/topic/25543043
以上是别人的总结。
建议:你找实验室可信的人要2组细胞的样品,
第1组4个样:没有细胞凋亡的,未加破坏性药物处理。
第2组4个样:含有加破坏性药物的,比如MPP+,当然必须有negative control。
第三组4个样:你自己脊髓的样品,有药物处理组、对照组。
全部同样操作,一起定量,一起上样,一块胶,一张膜……
配胶的时候严格按照配方来,下层胶在加APS后充分摇匀,再加TEMED摇匀,用100%的乙醇1 ml液封,凝30-45min,上层胶凝25 min。做可以和内参裁开的目的蛋白,随便什么,建议找一个非常好做的。
然后看结果,到底是你实验操作的问题,还是样品的问题。
2楼2013-10-18 09:07:27
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