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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 脊髓做WB 内参总是不齐
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gyl1990915

铁虫 (初入文坛)

[求助] 脊髓做WB 内参总是不齐

每次用脊髓做WB，内参总是不整齐。求高手解释，定量和上样都没有问题
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1楼 2013-10-17 13:47:48
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beckham27

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
http://muchong.com/html/201103/2946562.html
http://bbs.bbioo.com/thread-96560-1-1.html
http://www.dxy.cn/bbs/topic/19720782
http://www.biomart.cn/experiment/87/question/309.htm
http://www.dxy.cn/bbs/topic/25543043
以上是别人的总结。
建议：你找实验室可信的人要2组细胞的样品，
第1组4个样：没有细胞凋亡的，未加破坏性药物处理。
第2组4个样：含有加破坏性药物的，比如MPP+，当然必须有negative control。
第三组4个样：你自己脊髓的样品，有药物处理组、对照组。
全部同样操作，一起定量，一起上样，一块胶，一张膜……
配胶的时候严格按照配方来，下层胶在加APS后充分摇匀，再加TEMED摇匀，用100%的乙醇1 ml液封，凝30-45min，上层胶凝25 min。做可以和内参裁开的目的蛋白，随便什么，建议找一个非常好做的。
然后看结果，到底是你实验操作的问题，还是样品的问题。
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2楼2013-10-18 09:07:27
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