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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 实时荧光定量pcr，cDNA的加入量会影响结果的准确度吗？
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963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-10-18 16:50:54
我表示赞同斑竹。我们都是做了cdna后，稀释1倍作为模板的。也就是说假设逆转录是20μl体系，要稀释成40μl之后取1微升为模板。您这个量实在是太多了...

嗯，是挺多的，就是想知道会不会有什么负作用？
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21楼2013-10-22 11:35:28
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沙门小rna

金虫 (正式写手)
引用回帖:
21楼: Originally posted by 963979587 at 2013-10-22 11:35:28
嗯，是挺多的，就是想知道会不会有什么负作用？...

大概会影响效率吧，你可以看看你的扩增效率。模板浓度太高不好的，有可能扩不出来。
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
22楼2013-10-22 14:44:06
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963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
22楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-10-22 14:44:06
大概会影响效率吧，你可以看看你的扩增效率。模板浓度太高不好的，有可能扩不出来。...

怎么看扩增效率啊？我也觉得模板量多了不好，第二天再重复做的效果就差好多？
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23楼2013-10-22 21:37:57
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963979587

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by taccycle at 2013-10-17 11:25:18
RNA电泳的话要用1%的胶和那个2000的Marker，如果没有电泳条带就说明你的RNA浓度有点低，那你反转录的时候可以多用点RNA，同时相应减少体系中水的用量。1%的胶不适合用来检测短片段，你至少配制个2%的胶，这样用200 ...

1%的不行吗？不是都用1%的胶做rna电泳吗？
我做DNA电泳连mark都跑不出来，也没觉得出什么问题啊？
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24楼2013-10-22 21:40:45
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华中农业大学

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-14 22:31:01
你的模板用量不是一般的大。通常情况下是用1μg RNA反转录后稀释5倍后取1μl做模板。把熔解曲线图发上来看看。CT值是多少？是否在15-30之间？

你好，我也是用的1ug做的反转录，后面稀释的是50倍，跑内参时CT值很高，在30左右，这样行吗？
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华中农业大学爱我
25楼2016-03-22 13:39:00
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