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963979587

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-10-18 16:50:54
我表示赞同斑竹。我们都是做了cdna后,稀释1倍作为模板的。也就是说假设逆转录是20μl体系,要稀释成40μl之后取1微升为模板。您这个量实在是太多了...

嗯,是挺多的,就是想知道会不会有什么负作用?
21楼2013-10-22 11:35:28
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

引用回帖:
21楼: Originally posted by 963979587 at 2013-10-22 11:35:28
嗯,是挺多的,就是想知道会不会有什么负作用?...

大概会影响效率吧,你可以看看你的扩增效率。模板浓度太高不好的,有可能扩不出来。
应助之星就是我~没错。你没有看错~
22楼2013-10-22 14:44:06
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963979587

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
22楼: Originally posted by 沙门小rna at 2013-10-22 14:44:06
大概会影响效率吧,你可以看看你的扩增效率。模板浓度太高不好的,有可能扩不出来。...

怎么看扩增效率啊?我也觉得模板量多了不好,第二天再重复做的效果就差好多?
23楼2013-10-22 21:37:57
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963979587

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
18楼: Originally posted by taccycle at 2013-10-17 11:25:18
RNA电泳的话要用1%的胶和那个2000的Marker,如果没有电泳条带就说明你的RNA浓度有点低,那你反转录的时候可以多用点RNA,同时相应减少体系中水的用量。1%的胶不适合用来检测短片段,你至少配制个2%的胶,这样用200 ...

1%的不行吗?不是都用1%的胶做rna电泳吗?
我做DNA电泳连mark都跑不出来,也没觉得出什么问题啊?
24楼2013-10-22 21:40:45
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华中农业大学

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-14 22:31:01
你的模板用量不是一般的大。通常情况下是用1μg RNA反转录后稀释5倍后取1μl做模板。把熔解曲线图发上来看看。CT值是多少?是否在15-30之间?

你好,我也是用的1ug做的反转录,后面稀释的是50倍,跑内参时CT值很高,在30左右,这样行吗?
华中农业大学爱我
25楼2016-03-22 13:39:00
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