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浅歌99

新虫 (初入文坛)

[求助] 建库酶切问题求助!!

建BAC文库时,提取了细胞核DNA然后进行低熔点琼脂糖的包埋,制成了这个包埋块。经过蛋白酶K的处理后,进行了不同浓度Hind III 的酶切,酶切了一个小时,之后跑的脉冲电泳,设置的场强为6V/cm,跑了20个小时。得到的这个结果。两侧的泳道是marker,中间泳道是酶切DNA的结果,设置了Hind III 酶的浓度梯度,从左到右分别为0U 2U 4U 6U 8U 10U。但跑出来基本上没有什么差别。很急,周围没有做这方面的,各位大侠指导一下吧!谢了!!
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  • 2013-10-11 21:04:52, 158.15 K

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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

引用回帖:
10楼: Originally posted by 浅歌99 at 2013-10-28 09:00:40
能不能把你提细胞核的参考方法发我一份,我参考的是罗美中和Rod.A.Wing的文章。非常感谢...

http://www.nature.com/nprot/jour ... nprot.2011.455.html

nature protocol的文章
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
18楼2013-10-30 22:13:39
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查看全部 21 个回答

wfmfj

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-14 21:46:29
浅歌99: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-30 09:53:04
有没有设对照?未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差,酶切一个小时也太长了,取1/3 plug做实验的话,正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净,改善方法再重新制备plug吧。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

扣鼻屎的姿势很帅
2楼2013-10-14 16:23:54
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文库构建

铁虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-10-24 19:04:30
构建BAC文库是一件非常复杂工作量的工作,大型BAC文库筛选更是一件庞大的工程。去年我们实验室试做构建过BAC文库,遇到很多疑问,由于项目紧迫,最终还是委托专业公司代做的。文库平均插入片段在100kb以上,均一性良好。文库质量还不错。希望你能顺利完成BAC文库构建筛选工作。
3楼2013-10-17 09:33:25
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浅歌99

新虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by wfmfj at 2013-10-14 16:23:54
有没有设对照?未酶切对照和过量酶切对照都要设。
另外从图上可以看出你的plug质量很差,酶切一个小时也太长了,取1/3 plug做实验的话,正常情况下超过不要15min。可能蛋白、多糖或多酚类物质去除不干净,改善方法 ...

好,我试试再做一下。已经制成的胶块还有办法改善一下吗?
4楼2013-10-24 14:37:03
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