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新虫 (初入文坛)

[求助] sephadex-G100分离菌胞外蛋白

第一图为分离的菌的胞外蛋白凝胶层析结果,Sephadex-G100分离蛋白条件如下:
柱长:1.6*60(cm)
流速:1ml/min
上样量:2.5ml,1.5mg/ml
洗脱液: 0.05M PBS
第一个峰的洗脱体积为:27ml,第二个峰的洗脱体积为:84ml
取较接近两个峰顶的管进行透析浓缩,接下来用SDS-PAGE检验两峰的分子量大小








第二图为SDS-PAGE检验两峰的分子量大小
  
1         2          3         4
1-Marker   2-菌的胞外全蛋白   3-凝胶层析后的一峰  4-凝胶层析后的一峰
各位大神,帮帮忙!!!!
这个实验合常理吗?因为上次老师竟然说我做出的实验不对劲,唉,无奈呀。。。帮帮忙
整个过程没什么不对劲的地方吧。。。。。
附件里有图片参考,及具体过程sephadex-G100分离菌胞外蛋白
20130624_092107_mh1381209284565.jpg
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  • 2013-10-10 21:26:03, 450 K

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云端端

新虫 (初入文坛)

自己顶一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2013-10-11 09:03:15
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试验作的很好,两个峰对应两个蛋白,分离的很好。有没什么不对的?没看出来。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
3楼2013-10-11 10:42:41
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
云端端: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-11 17:01:12
第一个峰蛋白70KD,出峰位置应该在内水体积部分,你的出峰位置不对,提前了,可能是这个问题吧。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
4楼2013-10-11 10:51:13
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525xielimeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
做的真不错,羡慕我也在做蛋白酶分离,可是g100我都搞不定,电泳也做不出来
5楼2013-10-11 10:53:33
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云端端

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-11 10:51:13
第一个峰蛋白70KD,出峰位置应该在内水体积部分,你的出峰位置不对,提前了,可能是这个问题吧。

那一般内水体积怎么算哪?是多大体积呀?
6楼2013-10-11 16:52:38
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云端端

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 525xielimeng at 2013-10-11 10:53:33
做的真不错,羡慕我也在做蛋白酶分离,可是g100我都搞不定,电泳也做不出来

thank you
7楼2013-10-11 16:53:44
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 云端端 at 2013-10-11 16:52:38
那一般内水体积怎么算哪?是多大体积呀?...

你要看说明书了。一般是1/3柱体积。你的柱体积是120ml,所以内水体积在40ml之后的部分。你看看书,书上有讲过。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
8楼2013-10-11 17:16:21
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云端端

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-11 17:16:21
你要看说明书了。一般是1/3柱体积。你的柱体积是120ml,所以内水体积在40ml之后的部分。你看看书,书上有讲过。...

哦,好的。。谢谢
9楼2013-10-11 17:31:44
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云端端

新虫 (初入文坛)

大家踊跃发言哪
10楼2013-10-11 19:42:07
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