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云端端

新虫 (初入文坛)

[求助] sephadex-G100分离菌胞外蛋白

第一图为分离的菌的胞外蛋白凝胶层析结果，Sephadex-G100分离蛋白条件如下：
柱长：1.6*60（cm）
流速：1ml/min
上样量：2.5ml，1.5mg/ml
洗脱液: 0.05M PBS
第一个峰的洗脱体积为：27ml，第二个峰的洗脱体积为：84ml
取较接近两个峰顶的管进行透析浓缩，接下来用SDS-PAGE检验两峰的分子量大小








第二图为SDS-PAGE检验两峰的分子量大小
  
1         2          3         4
1-Marker   2-菌的胞外全蛋白   3-凝胶层析后的一峰  4-凝胶层析后的一峰
各位大神，帮帮忙！！！！
这个实验合常理吗？因为上次老师竟然说我做出的实验不对劲，唉，无奈呀。。。帮帮忙
整个过程没什么不对劲的地方吧。。。。。
附件里有图片参考，及具体过程sephadex-G100分离菌胞外蛋白
20130624_092107_mh1381209284565.jpg
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    • 2013-10-10 21:26:03, 450 K

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1楼 2013-10-10 21:27:04
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云端端

新虫 (初入文坛)
自己顶一下

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-10-11 09:03:15
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试验作的很好，两个峰对应两个蛋白，分离的很好。有没什么不对的？没看出来。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
3楼2013-10-11 10:42:41
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
云端端: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-11 17:01:12
第一个峰蛋白70KD，出峰位置应该在内水体积部分，你的出峰位置不对，提前了，可能是这个问题吧。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
4楼2013-10-11 10:51:13
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525xielimeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做的真不错，羡慕我也在做蛋白酶分离，可是g100我都搞不定，电泳也做不出来
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5楼2013-10-11 10:53:33
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云端端

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-11 10:51:13
第一个峰蛋白70KD，出峰位置应该在内水体积部分，你的出峰位置不对，提前了，可能是这个问题吧。

那一般内水体积怎么算哪？是多大体积呀？
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6楼2013-10-11 16:52:38
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云端端

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 525xielimeng at 2013-10-11 10:53:33
做的真不错，羡慕我也在做蛋白酶分离，可是g100我都搞不定，电泳也做不出来

thank you
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7楼2013-10-11 16:53:44
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 云端端 at 2013-10-11 16:52:38
那一般内水体积怎么算哪？是多大体积呀？...

你要看说明书了。一般是1/3柱体积。你的柱体积是120ml，所以内水体积在40ml之后的部分。你看看书，书上有讲过。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
8楼2013-10-11 17:16:21
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云端端

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 同东中郎将 at 2013-10-11 17:16:21
你要看说明书了。一般是1/3柱体积。你的柱体积是120ml，所以内水体积在40ml之后的部分。你看看书，书上有讲过。...

哦，好的。。谢谢
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9楼2013-10-11 17:31:44
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云端端

新虫 (初入文坛)
大家踊跃发言哪
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10楼2013-10-11 19:42:07
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