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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 切除信号肽的蛋白中一个氨基酸发生突变是否影响酶活及制备抗体
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蓝素心

铜虫 (初入文坛)

[求助] 切除信号肽的蛋白中一个氨基酸发生突变是否影响酶活及制备抗体

如题，通过分析将信号肽切除了，后来测序发现一个氨基酸发生突变，SDS-PAGE分析显示在上清中有表达，这样是否会影响酶活？一个氨基酸突变，如果制备抗体的话，是否可行？目标蛋白约100KD……求各位大神指导！
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1楼 2013-10-10 17:15:12
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-10-29 09:53:36
蛋白有点大，体外表达可能影响蛋白的结构和修饰，所以没有酶活是可能的。但是对抗体制备没有影响。具体的制备要求如果送公司，那么最好问问公司的要求。如果自己制备，注意蛋白是否降解是关键，直接影响后面所有步骤。其他的话按照protocol就没有什么问题了。
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Let'sdoit.
4楼2013-10-11 16:20:18
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-10-10 18:04:35
蓝素心: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-11 10:10:12
需要分析一下突变氨基酸和原来氨基酸的性质，然后看看对蛋白结构有无重要影响。 不过一般来说，这么大的蛋白，影响不会很大，可以制备抗体。 因为有时候制备抗体的时候可以用肽段或者denature的蛋白，所以应该没有什么大影响。
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Let'sdoit.
2楼2013-10-10 17:37:02
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蓝素心

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-10-10 17:37:02
需要分析一下突变氨基酸和原来氨基酸的性质，然后看看对蛋白结构有无重要影响。 不过一般来说，这么大的蛋白，影响不会很大，可以制备抗体。 因为有时候制备抗体的时候可以用肽段或者denature的蛋白，所以应该没有什 ...

谢谢你，因为最后一直没有检测到酶活，不想影响后面制备抗体的时间，就想先做WESTERN，按突变率算的话，基本上在 千分之二，抗体制备时有什么要求吗？
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3楼2013-10-11 10:01:25
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蓝素心

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yimingwang at 2013-10-11 16:20:18
蛋白有点大，体外表达可能影响蛋白的结构和修饰，所以没有酶活是可能的。但是对抗体制备没有影响。具体的制备要求如果送公司，那么最好问问公司的要求。如果自己制备，注意蛋白是否降解是关键，直接影响后面所有步骤 ...

如果没有酶活的话，要抗体的意义好像不大吧？纯化是打算交给公司做的。
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5楼2013-10-29 09:32:08
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