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蓝素心

铜虫 (初入文坛)

[求助] 切除信号肽的蛋白中一个氨基酸发生突变是否影响酶活及制备抗体

如题,通过分析将信号肽切除了,后来测序发现一个氨基酸发生突变,SDS-PAGE分析显示在上清中有表达,这样是否会影响酶活?一个氨基酸突变,如果制备抗体的话,是否可行?目标蛋白约100KD……求各位大神指导!
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-10-10 18:04:35
蓝素心: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-10-11 10:10:12
需要分析一下突变氨基酸和原来氨基酸的性质,然后看看对蛋白结构有无重要影响。 不过一般来说,这么大的蛋白,影响不会很大,可以制备抗体。 因为有时候制备抗体的时候可以用肽段或者denature的蛋白,所以应该没有什么大影响。
Let'sdoit.
2楼2013-10-10 17:37:02
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蓝素心

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-10-10 17:37:02
需要分析一下突变氨基酸和原来氨基酸的性质,然后看看对蛋白结构有无重要影响。 不过一般来说,这么大的蛋白,影响不会很大,可以制备抗体。 因为有时候制备抗体的时候可以用肽段或者denature的蛋白,所以应该没有什 ...

谢谢你,因为最后一直没有检测到酶活,不想影响后面制备抗体的时间,就想先做WESTERN,按突变率算的话,基本上在 千分之二,抗体制备时有什么要求吗?
3楼2013-10-11 10:01:25
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2013-10-29 09:53:36
蛋白有点大,体外表达可能影响蛋白的结构和修饰,所以没有酶活是可能的。但是对抗体制备没有影响。具体的制备要求如果送公司,那么最好问问公司的要求。如果自己制备,注意蛋白是否降解是关键,直接影响后面所有步骤。其他的话按照protocol就没有什么问题了。
Let'sdoit.
4楼2013-10-11 16:20:18
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蓝素心

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yimingwang at 2013-10-11 16:20:18
蛋白有点大,体外表达可能影响蛋白的结构和修饰,所以没有酶活是可能的。但是对抗体制备没有影响。具体的制备要求如果送公司,那么最好问问公司的要求。如果自己制备,注意蛋白是否降解是关键,直接影响后面所有步骤 ...

如果没有酶活的话,要抗体的意义好像不大吧?纯化是打算交给公司做的。
5楼2013-10-29 09:32:08
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