应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 请教140KD蛋白的转膜条件
52/1返回列表
查看: 5694  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Silenceli

铁虫 (小有名气)

[求助] 请教140KD蛋白的转膜条件

请教各位前辈，最近在做  TLR7140kd的蛋白，试过的转膜条件有恒压100v（电流在236ma左右）,转2小时；横流300ma(电压在135v左右)2小时，转完膜后用丽春红染膜，可以看到170kd的蛋白条带，用的是（10-170kd）的Marker，但显影的时候我的目的条带没有出现，用的一抗是CST的推荐浓度1：1000,1:800，均试过，二抗1:5000，1:8000，1:9000,1：10000，140kd的条带始终没有出现，170kd的条带却压出来了，虽然条带很细，而且背景也很深请问各位前辈我的转膜条件有问题吗？还是需要提高一抗浓度？应该如何改进，请各位前辈不吝赐教，谢谢，急急急！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-10-05 21:11:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

feilinshiji

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by Silenceli at 2013-10-07 13:49:19
麻烦请教一下TLR7（分子量140）的表达很低吗请问您做过相关研究？请指教~上样量40微克，一抗试了推荐浓度1:1000，1:800,1:600都没有在分子量140的位置压出条带，但在170的位置能压出很细的条带，若是170的位置能压 ...

我没做过TLR的表达，但是我们实验室有人做过TLR相关的课题，中途需要TLR的抗体，结果死活表达不出来，最后找公司做，公司说TLR表达属于一个难点问题，不保证能表达出来。主要是TLR属于多次跨膜蛋白，结果非常复杂
赞一下 回复此楼
17楼2013-10-08 08:34:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

DAX1

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-06 02:02:23
Silenceli: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-06 22:52:08
Cst的抗体一般没问题，不过还是建议楼主可以过表达下蛋白，检测下抗体特异性以及到底多大。还有内源蛋白最好转膜过夜，10%胶可以恒流50毫安。然后一抗过夜。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-06 00:24:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljsh

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们转膜条件：150mA 120min
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-06 08:28:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Silenceli

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by DAX1 at 2013-10-06 00:24:31
Cst的抗体一般没问题，不过还是建议楼主可以过表达下蛋白，检测下抗体特异性以及到底多大。还有内源蛋白最好转膜过夜，10%胶可以恒流50毫安。然后一抗过夜。
...

恩好的，请问过表达是不是将一抗的浓度提高到最大如1:100,是这样吗？推荐浓度是1:1000，
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-06 22:51:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +3 process2012 2026-08-23 4/200 2026-08-23 12:54 by huixian257
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 h4CP7TrQR8Lg 2026-08-22 5/250 2026-08-23 12:09 by LR9qGULyN2ew
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +15 羊腰板 2026-08-21 16/800 2026-08-23 10:45 by process2012
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 10:44 by IXZuIJ2Q7OVy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 14/700 2026-08-23 10:30 by wrm
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭