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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切条带很亮，胶回收完了就没条带了，求大神指教
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科技广场

铜虫 (小有名气)

[求助] 酶切条带很亮，胶回收完了就没条带了，求大神指教

酶切条带很亮，胶回收完了就没条带了，求大神指教，谢谢？
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1楼 2013-09-30 13:14:03
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:11:02
看不到条带也可以继续往下做试试，只要确定柱子没有问题，回收回来的有你要的东西，继续往下做应该一样可以做出来，分子生物学操作有时候不是以量取胜撒
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不断丰富自己
3楼2013-09-30 14:20:46
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普通回帖

超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:08:07
酶切条带很亮不足以说明你的片段浓度很高，要看你紫外激发时间长短了。最好用仪器进行浓度测定，而不是跑胶看亮度来定量。一般胶回收试剂盒会说回收效率有80%-90%左右，但是用了这么多种试剂盒这么多年的胶回收经验感觉收率也就20%-50%。
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2楼2013-09-30 13:53:28
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by pengpeng7196 at 2013-09-30 14:20:46
看不到条带也可以继续往下做试试，只要确定柱子没有问题，回收回来的有你要的东西，继续往下做应该一样可以做出来，分子生物学操作有时候不是以量取胜撒

胶回收后跑出的条带总是弥散状？不知道什么原因
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4楼2013-09-30 14:23:42
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:11:08
引用回帖:
4楼: Originally posted by 科技广场 at 2013-09-30 14:23:42
胶回收后跑出的条带总是弥散状？不知道什么原因...

那可能是有些回收过程中DNA被污染，或者你的胶、跑胶体系有问题，可能原因很多，我建议如果重复几次都这样，可以考虑继续往下做试试
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不断丰富自己
5楼2013-09-30 14:46:00
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科技广场

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pengpeng7196 at 2013-09-30 14:46:00
那可能是有些回收过程中DNA被污染，或者你的胶、跑胶体系有问题，可能原因很多，我建议如果重复几次都这样，可以考虑继续往下做试试...

每次都是这样

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2013-09-30 15:05:40
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desheng101

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:11:14
酶切条带很亮，但是回收很少，说明肯定是回收方面出现的问题。建议楼主按照说明书循循渐进的来，可以把酶切产物多管回收，最后溶于水可以少加一点。
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7楼2013-09-30 15:06:42
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liyue0402

新虫 (初入文坛)
我现在也是这样呢，大载体酶切很亮，一胶回收就没了，要不就是弥散，很愁人啊，想问一下你后来是怎么做出来的，谢谢
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8楼2013-09-30 15:23:39
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yonghuixie

禁虫 (小有名气)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:11:21
本帖内容被屏蔽
9楼2013-09-30 16:15:00
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白菜吃虫

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-30 17:11:27
注意一下胶回收试剂盒的产品说明，能回收多大的片段，最大能回收多少。不行就换个试剂盒。
酶切完以后让酶变性失活一下终止反应（说明书上应该有方法），试一试行不行。
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10楼2013-09-30 17:03:17
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