| 查看: 2161 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
新手做原核表达 求帮忙
|
||
|
老师让我做效应蛋白原核表达，只是给了我一个蛋白序列的登陆号，其他自己摸索。 在看文献问百度之后，了解了效应蛋白，明白了原核表达的基本步骤。梳理一下： 1.提RNA。（因为是真菌，有内含子，只能反转录。） 2.设计引物。 3.反转录PCR。 4.连接T载体，转入感受态，挑阳性克隆送去测序，验证所得序列是否正确。 5.假设序列正确，提质粒，酶切，连接表达载体，转入表达菌。 不知道这样的步骤有哪些地方有错误或者不合理，希望大家给予指正，万分感谢。 还有，我现在想要设计引物，因为老师只给了一个蛋白序列的登录号，我水平有限，在NCBI上只能获得该氨基酸序列对应的cDNA序列，并不能获得完整的cDNA序列，因为没有两端的序列，我就不能设计引物，求帮助！ 我是新虫，只有21个金币，真心感谢大神们的帮助指导！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
wangpeng227
木虫 (小有名气)
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 1623.6
- 红花: 2
- 帖子: 270
- 在线: 148.2小时
- 虫号: 448896
- 注册: 2007-11-02
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
20楼2013-09-27 15:14:56
淘淘279
铜虫 (小有名气)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 934.8
- 帖子: 64
- 在线: 16.4小时
- 虫号: 2670382
- 注册: 2013-09-22
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2013-09-25 22:24:58
3楼2013-09-25 22:26:22
4楼2013-09-26 09:43:07
