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[求助]
新手做原核表达 求帮忙
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老师让我做效应蛋白原核表达，只是给了我一个蛋白序列的登陆号，其他自己摸索。 在看文献问百度之后，了解了效应蛋白，明白了原核表达的基本步骤。梳理一下： 1.提RNA。（因为是真菌，有内含子，只能反转录。） 2.设计引物。 3.反转录PCR。 4.连接T载体，转入感受态，挑阳性克隆送去测序，验证所得序列是否正确。 5.假设序列正确，提质粒，酶切，连接表达载体，转入表达菌。 不知道这样的步骤有哪些地方有错误或者不合理，希望大家给予指正，万分感谢。 还有，我现在想要设计引物，因为老师只给了一个蛋白序列的登录号，我水平有限，在NCBI上只能获得该氨基酸序列对应的cDNA序列，并不能获得完整的cDNA序列，因为没有两端的序列，我就不能设计引物，求帮助！ 我是新虫，只有21个金币，真心感谢大神们的帮助指导！ |
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