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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 新手做原核表达 求帮忙
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862202686

铁虫 (初入文坛)

[求助] 新手做原核表达 求帮忙

老师让我做效应蛋白原核表达，只是给了我一个蛋白序列的登陆号，其他自己摸索。 在看文献问百度之后，了解了效应蛋白，明白了原核表达的基本步骤。梳理一下：
1.提RNA。（因为是真菌，有内含子，只能反转录。）
2.设计引物。
3.反转录PCR。
4.连接T载体，转入感受态，挑阳性克隆送去测序，验证所得序列是否正确。
5.假设序列正确，提质粒，酶切，连接表达载体，转入表达菌。
不知道这样的步骤有哪些地方有错误或者不合理，希望大家给予指正，万分感谢。
还有，我现在想要设计引物，因为老师只给了一个蛋白序列的登录号，我水平有限，在NCBI上只能获得该氨基酸序列对应的cDNA序列，并不能获得完整的cDNA序列，因为没有两端的序列，我就不能设计引物，求帮助！
我是新虫，只有21个金币，真心感谢大神们的帮助指导！
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1楼 2013-09-25 21:51:35
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zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原核表达完全手册
http://www.doc88.com/p-66519303551.html
原核表达操作流程
http://www.everlab.net/news/7D75 ... 4-AACB3C3319FF.html
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22楼2013-09-27 17:16:09
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