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生院深似海

金虫 (初入文坛)

[求助] 让人恼火的涂平板计数,求助~~ 已有2人参与

最近需要对菌液进行培养并计数~我通常都是先用流式细胞仪测出菌液浓度,再根据这个数据进行梯度稀释,然后涂平板~一般做4个梯度,将菌液稀释到10的1次、2次、3次、4次方,这样涂~但是,实验结果总是不稳定,大多数时候不长菌。。。很让人恼火~大家有没有类似经历,帮我看看哪里出为题了呗~!!非常感谢~
我养的菌是大肠和金黄,寡营养条件摇的,大概把LB培养液稀释了一万倍以上~
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

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3楼: Originally posted by wangfei179 at 2013-09-25 10:39:20
万分之一LB,多少度培养,养多久?

37℃,养4天~ 用的原浓度固体培养基,应该没问题吧?
5楼2013-09-25 18:35:57
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

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2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-25 02:32:33
我一般直接测OD估算菌的大致浓度,然后梯度稀释的。一般做三个梯度就可以了。不清楚是不是流式细胞仪的问题。

哦~我还真没用OD值估算过~那麻烦问下,一般OD值怎么估算成浓度呢??如果是凭经验,能给举几个对应的例子不?3Q~~
6楼2013-09-25 18:37:49
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

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4楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-09-25 12:57:42
楼主能把具体操作说明确点吗?梯度稀释和你选择的稀释体积,培养基摇匀程度关系很大,体积太小的话,误差是很大的。

我摇菌用的20ml培养液。稀释的时候都是稀释成1ml。比如稀释10倍,就在EP管中加900ul灭菌的超纯水,再加100ul菌液~
7楼2013-09-25 18:39:40
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

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9楼: Originally posted by mengtaji at 2013-09-25 21:03:34
会不会是涂布棒太热了没凉下来,,,我以前是这种原因过

NONO,绝对不是,我每次涂之前都要在手腕上试过的~基本都彻底凉了才涂。。。
10楼2013-09-25 21:55:21
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

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16楼: Originally posted by sam-lifei at 2013-09-30 19:31:10
我同学算是微生物计数吧,不过他不是专门做这个,是顺便做的一个,做益生菌的。被抑制的菌营养丰富点培养时间长点也长不出么?...

培养时间长点是多久呢??我试过4天 还是没长出来什么~应该算久了吧~呼呼
18楼2013-10-09 12:54:36
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