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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 让人恼火的涂平板计数，求助~~
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生院深似海

金虫 (初入文坛)

[求助] 让人恼火的涂平板计数，求助~~ 已有2人参与

最近需要对菌液进行培养并计数~我通常都是先用流式细胞仪测出菌液浓度，再根据这个数据进行梯度稀释，然后涂平板~一般做4个梯度，将菌液稀释到10的1次、2次、3次、4次方，这样涂~但是，实验结果总是不稳定，大多数时候不长菌。。。很让人恼火~大家有没有类似经历，帮我看看哪里出为题了呗~！！非常感谢~
我养的菌是大肠和金黄，寡营养条件摇的，大概把LB培养液稀释了一万倍以上~
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1楼 2013-09-24 22:50:35
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jianandy

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 生院深似海 at 2013-09-25 18:39:40
我摇菌用的20ml培养液。稀释的时候都是稀释成1ml。比如稀释10倍，就在EP管中加900ul灭菌的超纯水，再加100ul菌液~...

100微升菌液加900微升超纯水，培养液中的离子浓度降低了10倍，其他稀释度下离子浓度降低的更多，细菌细胞基本上都溶胀破裂了，怎么还可能生长？楼主说细菌不长，很有可能是渗透压变了。建议用与培养基相同盐浓度的溶液稀释。
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11楼2013-09-25 23:19:07
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-09-25 16:25:47
我一般直接测OD估算菌的大致浓度，然后梯度稀释的。一般做三个梯度就可以了。不清楚是不是流式细胞仪的问题。
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2楼2013-09-25 02:32:33
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wangfei179

木虫 (小有名气)
万分之一LB，多少度培养，养多久？
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3楼2013-09-25 10:39:20
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lmqml24

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-09-25 12:57:42
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生院深似海

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wangfei179 at 2013-09-25 10:39:20
万分之一LB，多少度培养，养多久？

37℃，养4天~ 用的原浓度固体培养基，应该没问题吧？
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5楼2013-09-25 18:35:57
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生院深似海

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-25 02:32:33
我一般直接测OD估算菌的大致浓度，然后梯度稀释的。一般做三个梯度就可以了。不清楚是不是流式细胞仪的问题。

哦~我还真没用OD值估算过~那麻烦问下，一般OD值怎么估算成浓度呢？？如果是凭经验，能给举几个对应的例子不？3Q~~
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6楼2013-09-25 18:37:49
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生院深似海

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lmqml24 at 2013-09-25 12:57:42
楼主能把具体操作说明确点吗？梯度稀释和你选择的稀释体积，培养基摇匀程度关系很大，体积太小的话，误差是很大的。

我摇菌用的20ml培养液。稀释的时候都是稀释成1ml。比如稀释10倍，就在EP管中加900ul灭菌的超纯水，再加100ul菌液~
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7楼2013-09-25 18:39:40
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Lxcuty

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己也曾经出现过这种问题，很可能是由于你的菌液浓度本身已经很低在5次方左右，你又稀释了4次方的基础上又稀释四个梯度，从而导致你大部分的涂平板不长菌。其实你微生物的计数你可以尝试一下倾注法，这个很简便适合微生物的计数。希望对你有所帮助。
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8楼2013-09-25 20:33:48
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mengtaji

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是涂布棒太热了没凉下来，，，我以前是这种原因过
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天道酬勤
9楼2013-09-25 21:03:34
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生院深似海

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by mengtaji at 2013-09-25 21:03:34
会不会是涂布棒太热了没凉下来，，，我以前是这种原因过

NONO，绝对不是，我每次涂之前都要在手腕上试过的~基本都彻底凉了才涂。。。
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10楼2013-09-25 21:55:21
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