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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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zhzecai

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 小墨825 at 2013-09-27 15:19:51
你的想法跟老师提的一样。初始溶液中加入1%的Triton X-114分为上层1和下层1,上层1继续加入1%的Triton X-114,再次分层,得到上层2和下层2,上层2重复上述步骤,得到下层3,合并下层1、2、3使用PBS进行分层,重复2 ...

您好,我有几个问题想请教您一下,外膜蛋白最终溶解在triton-114中能做直接细胞实验吗?我看有的文献上最终用丙酮进行蛋白质的沉淀,但是我怀疑蛋白质会不会失活啊?还有就算蛋白质沉淀了,那么用哪种溶液能溶解外膜蛋白呢?因为我想用外膜蛋白做细胞实验
17楼2013-10-19 22:56:35
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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