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小墨825

新虫 (小有名气)

[求助] Triton X-114法提取膜蛋白

利用Triton X-114法分层得到膜蛋白(下层),怎么把Triton X-114去除?有没有可能将膜蛋白转移到水相?衷心求助!
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小墨825 at 2013-09-19 16:44:09
哎呀,您太谦虚啦!我就是利用Triton X-114的方法分层的,非离子表面活性剂Triton X-114溶液在0 ℃下分布均匀,但高于20 ℃时分为水相和去污相(含膜蛋白)。在初始溶液中加入1%的Triton X-114,进行多次分层,收集 ...

我想TRITON X-114层再溶解的时候,最好TRITON X-114的浓度还为1%或更低。不知你稀释的倍数是多少,因为大量稀释后,表面活性剂在水溶液中会形成胶束,胶束的粒径可能比你透析或超滤的孔径都大,如果浓度高,那么表面活性剂是透不过去的,超滤也除不掉。我想,分层提取之后,用缓冲液溶解回原来的体积甚至更大,然后超滤浓缩其中的蛋白,然后换成1 % TRITON X-100的溶液。以上是个人想法,仅供参考。我没有做过分层萃取蛋白的实验,我还是有很多问题想你能解答我的。
12楼2013-09-23 19:12:33
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

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感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-17 22:41:16
TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇单[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚,是一种表面活性剂,会结合到膜蛋白质的表面形成一层亲水层,而表面活性剂的疏水层会结合到膜蛋白质的分子表面,这样包裹了TRITON X-114的蛋白质本身就到了水溶液里
2楼2013-09-17 22:24:52
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小墨825: 金币+20, ★★★很有帮助 2013-09-18 15:31:42
要把表面活性剂与膜蛋白质拆开,用分子筛层析分离出表面活性剂的疏水层会结合的膜蛋白质后,放置于烧杯的水溶液中,然后加大水溶液的非极性即可,比如加入水溶中乙醚。
3楼2013-09-17 22:28:53
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

然后用透析和超滤很容易出去蛋白质溶液中的有机分子,留下蛋白质。
4楼2013-09-17 22:31:27
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