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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 高分子 » 测试表征 » 高分子分子量测定：GPC LLS MS
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fyjqt

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
紫百合LYL: 金币+5, 感谢应助～ 2013-09-23 09:53:05
引用回帖:
20楼: Originally posted by beyondye at 2013-09-21 22:49:25
我们过膜前后紫外也没什么变化，但是我们的盐（氯化钠）加到了1.2M，这个是不是很高的值了？而且我们确实做出来的结果就是单峰的
     然后您说的这个散射光强就可以替代分子量还真没听说过，可否再具体说下i啊浓 ...

1. 散射体积校正。如果你把每个角度都算成(I-Is)/It了以后，就已经校正完了。理论上SLS应该测量单位体积的各角度的散射光强，事实上，例如30°和90°时，入射光柱与散射狭缝的截体积是不同的。甲苯是一种没有角度依赖性的物质，它在各个角度的散射光应该一样，不同时因为散射体积发生了变化，除以它一方面就是为了校正散射体积。
2. 散射光强和分子量。几个质量浓度相同的稀溶液样品，它们的分子量正比于零角度散射光强，近似估算或系列类比时可以用小角度光强。具体的推导我不详述了，你可以从任何一个散射方程（例如最简单的Zimm方程），忽略浓度外推和角度外推后得到。注意如果是摩尔浓度一样，那光强正比于散射光强的开方
3. 盐浓度。稀溶液散射通常是1 mg/mL - 0.1 mg/mL量级的高分子浓度，那么理论需要的抑制慢模式的盐浓度通常在mM级别。但是慢模式的理论目前还没有特别清晰，因此如果不存在盐析效应，且忽略加盐所带来的dn/dc的变化时，盐是越多越好的。
所谓盐析，是因为很多可溶的带电高分子（例如NaPSS），把电荷去掉以后其实是疏水的，溶解在水中是因为带了电。这在可溶时似乎不明显（事实上高分子物理的构象模型中，主链本身可溶与不可溶差别非常大），但是加入盐屏蔽了一定的静电作用的时候，就开始显现出来。那些主链不溶的高分子就开始因为不良溶剂的作用而聚集，甚至发生相分离。静电屏蔽可以用Debye屏蔽常数大致估算，通常盐析发生时，需要的盐浓度在M量级。
4.具体到你的样品，木质素是酚类结构，感觉去掉静电不是很好溶。1.2M有可能是聚集了，这样的话一样可以测量分子量，只是得到的是聚集体的分子量，可能会比较大。只凭单峰，是无法判断是否聚集的。一般盐析有个判断，如果你测量的1M，1.2M，1.5M等条件下，分子量明显越来越大，就是聚集了。如果三个分子量差不多，就可以认为是单分子。zeta电位只是相对值，不好计算。
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beyondye
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21楼2013-09-22 08:39:35
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beyondye

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21楼: Originally posted by fyjqt at 2013-09-22 08:39:35
1. 散射体积校正。如果你把每个角度都算成(I-Is)/It了以后，就已经校正完了。理论上SLS应该测量单位体积的各角度的散射光强，事实上，例如30°和90°时，入射光柱与散射狭缝的截体积是不同的。甲苯是一种没有角度依 ...

1.这个散射体积还是没用弄明白，是在仪器扫描中进行类似于紫外的基线操作了，还是对得到的数据进行个特殊的处理？DLS中直接有cumulant拟合，SLS也是软件自动处理，就不知道这个光强要怎么处理了。
2.原来是成正比啊，我还天真的以为可替代，失误。
3.按理来说我这个盐应该是盐析的浓度了，不过紫外没发现吸光度过膜后有减少，可能也是灵敏度不够，然后主要是过膜后，慢运动峰没了，我们就理解为了单分子的峰进行了一系列的表征，这边做MS，NMR其实都是想再验证哈。
4.谢谢斑竹大神这么多天来细心的解答啊，本人第一次求助来着，哈哈。然后想请教下怎样给出应助的金币了，确实都拖了这么多天了。
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我系威水叻仔
22楼2013-09-22 17:07:13
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fyjqt

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
紫百合LYL: 金币+3, 感谢应助～ 2013-09-23 09:55:15
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22楼: Originally posted by beyondye at 2013-09-22 17:07:13
1.这个散射体积还是没用弄明白，是在仪器扫描中进行类似于紫外的基线操作了，还是对得到的数据进行个特殊的处理？DLS中直接有cumulant拟合，SLS也是软件自动处理，就不知道这个光强要怎么处理了。
2.原来是成正比 ...

散射体积等知识可以参见参见http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5144858&fpage=2
cumulant拟合对于复杂体系并不太好，如果能选择NNLS或CONTIN拟合会更恰当一些。SLS的原始数据是每个角度的散射光强。以及如果你是仪器自动处理的数据，一些东西就没有必要考虑太多，手动数据处理的话至少要训练一个月的样子才不容易出错，公式中还是有很多要考虑的地方。如果你非常依赖光散射的结果，建议找个精通光散射的组合作，这样比较靠谱。
给金币，应该在你要给的那个回帖的下方（左下或右下吧，不知道现在在哪里了@紫百合LYL ），会有个非常明显的“评分”按钮，点进去就可以了。
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beyondye
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23楼2013-09-23 08:21:18
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beyondye

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23楼: Originally posted by fyjqt at 2013-09-23 08:21:18
散射体积等知识可以参见参见http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5144858&fpage=2
cumulant拟合对于复杂体系并不太好，如果能选择NNLS或CONTIN拟合会更恰当一些。SLS的原始数据是每个角度的散射光强。以 ...

做了个核磁，看来我们的LLS方法还有待加强，谢谢您这么多天的关注和帮助啊，以后再有问题向您请教啊。恩，看到了，金币散出去了，再次谢谢。
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我系威水叻仔
24楼2013-09-27 12:01:23
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