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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 其他分析 » 【求助】量子点与DNA偶联相关问题以及跑电泳的问题
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beiw

银虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】量子点与DNA偶联相关问题以及跑电泳的问题 已有1人参与

用羧基修饰的量子点经EDC/NHS活化后与氨基修饰的DNA偶联，摩尔比分别为1(QD）:2000（EDC）:2000（NHS）：100（DNA)，反应后因为量子点使用浓度低，看不到明显聚集，就直接超滤(100kDa)，12000转，20min，洗3次。然后跑了1%的琼脂糖凝胶电泳。
但是电泳显示只有QDs的条带，QD-DNA的孔道中与QD同水平的有极少量条带，但是没有QD-DNA的条带。
求问各位大虾，是否是偶联反应配比有问题，QD-DNA未发生反应?
                         还是超滤转速过大，QD-DNA都滤走了？（文献用3000转，但是尝试了发现没法离心出液体）
                         另外请教个电泳问题，QD不用类似于DNA用的loading buffer，如何保证QD能够很好的进入孔中，而不跑到电泳液中？
万分感谢！！
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一生所爱-cc
1楼 2013-09-12 22:01:42
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conanzzz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
beiw: 金币+2, ★有帮助 2013-09-13 10:55:16
1.不清楚
2.如果你确定下液没有荧光没漏,那有可能是QD浓度太低吸附到膜上或者管壁上了
3.6*那种DNA Loading Buffer不影响QD的
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2楼2013-09-13 09:49:01
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beiw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by conanzzz at 2013-09-13 09:49:01
1.不清楚
2.如果你确定下液没有荧光没漏,那有可能是QD浓度太低吸附到膜上或者管壁上了
3.6*那种DNA Loading Buffer不影响QD的

跑电泳时候，就直接把QD加到孔道里吗？不会跑到电泳液里吗？
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一生所爱-cc
3楼2013-09-13 10:54:59
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conanzzz

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by beiw at 2013-09-13 10:54:59
跑电泳时候，就直接把QD加到孔道里吗？不会跑到电泳液里吗？...

会,所以最好用DNA Loading Buffer上样,它对QD荧光没有影响
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4楼2013-09-16 09:29:50
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beiw

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by conanzzz at 2013-09-16 09:29:50
会,所以最好用DNA Loading Buffer上样,它对QD荧光没有影响...

感谢感谢！
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一生所爱-cc
5楼2013-09-16 09:45:57
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我想矮一点

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

请问楼主用的缓冲液是硼酸还是磷酸啊，我目前想重复类似于楼主的实验，但是一离心就聚沉了。。怀疑可能是缓冲液的问题
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6楼2014-01-03 17:48:23
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QZL19910907

铁虫 (初入文坛)
楼主问题解决了吗？我最近也在做这方面的 想知道怎么做
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7楼2016-07-04 19:57:46
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左左木森林

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by QZL19910907 at 2016-07-04 19:57:46
楼主问题解决了吗？我最近也在做这方面的 想知道怎么做

你找到文献了吗？
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8楼2018-05-28 21:05:07
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ikunly

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by beiw at 2013-09-12 22:01:42
用羧基修饰的量子点经EDC/NHS活化后与氨基修饰的DNA偶联，摩尔比分别为1(QD）:2000（EDC）:2000（NHS）：100（DNA)，反应后因为量子点使用浓度低，看不到明显聚集，就直接超滤(100kDa)，12000转，20min，洗3次。然后 ...

你好，请问你的DNA多大？

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9楼2018-05-29 14:19:17
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