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shaojh木虫 (著名写手)
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[求助]
求助植物叶片CAT和APX酶活性测定的问题！期待您的帮助。
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1.APX活性测定方法：2.5 ml 反应混合液包含 50 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.0），1mM EDTA，0.5 mM 抗坏血酸和 1 mM H2O2。反应的启动由加入 40 μL粗酶液，然后观测并记录随后 60 s 内在 290 nm 处吸光值的变化（Barka ，2001）。 存在的问题：（1）如果将酶液加入反应液后（比色皿）如果摇晃混匀后，测定值几乎不会发生变化。（用移液枪反复吹打也是类似效果） （2）如果不摇晃混匀，则测得的三个重复测定值差异很大，包括初始值和测定差值。 （3）也尝试了先加酶液，后加反应液混合，数值也是不稳定，60秒内差值很小为0.0X或0.00x。 请教做过类似实验的朋友，能够帮我解释下我的问题出在哪里？应该怎么做才能取得较好的效果？ 比如： 0-60‘ 10’读数 0.035，0.029，0.035，0.030，0.026，0.024，0.023 0.104，0.104，0.107，0.106，0.104，0.102，0.100 0.135，0.125，0.130，0.128，0.125，0.124，0.122 2.CAT 活性测定：2.5 ml 反应混合液包含 100 mM 磷酸盐缓冲液（pH 7.5）和 75 μL 粗酶液。反应的启动由加入 7.5 μL 34.8 mM H2O2，然后观测并记录随后 60 s 内在 240 nm 处吸光值的变化（Azevedo et al. 1998）。 存在问题：同上；测了三分钟，10‘一读数，吸光值总体先变大后变小，也有的数值是一直变小，极个别是一直变大。头痛死了，求助。 [ Last edited by shaojh on 2013-9-6 at 11:56 ] |
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