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yinjuanchen铁杆木虫 (著名写手)
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[求助]
质谱分析蛋白质溶剂比例
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Q1：如题，用质谱分析蛋白质，ESI源，在保证蛋白质不变性的前提下，有经验的前辈推荐下溶剂甲醇和水的比例。（我用1:1的比例，发生的严重的变性，只用水作溶剂，由于仪器本身的限制，电离电压最大为5500V，不能电离） Q2:通过质谱图的电荷分布，为何可以知道溶液中蛋白质存在几种构象？（构象不同，所带电荷不同，但怎么区分不同的构象，谱图有什么特征？） 谢谢！ [ 来自小组 Ocean家族 ] |
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lzjessie_wlf
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
yinjuanchen: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-09-26 08:08:40
yinjuanchen: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-09-26 08:08:40
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蛋白不变性指的是intact protein 的表征吗？一般0.1%的酸就变性了吧。 如果只是想知道分子量，那么将样品变性，除盐，在良溶剂中(水，ACN, MeOH) 加0.1%的酸所使用的样品量并不比直接带buffer检测所用量多。 如果要在buffer中，保持蛋白不变性的化，要求质谱能够检测到蛋白的话，一般来说蛋白的浓度要和buffer的浓度相当（即蛋白的浓度不小于buffer浓度的十倍). 同时使用buffer的浓度最大不超过10mM，优先使用可以气化的buffer （比如NH4HCO3, NH4Ac). 再其次的buffer是tris buffer。 如果蛋白溶在钠盐，钾盐之类的buffer中，可以通过透析交换buffer. 表面活性剂对蛋白的检测干扰也非常大。如果buffer中含有表面活性剂，要通过超滤膜(比如分子量截留1000， 3000，5000，10，000)等等，除掉不相干的小分子。 搜aldrich, millipore蛋白纯化产品，可以看到一系列的蛋白质除盐，缓冲液交换，样品浓缩，超滤膜等等相关的产品。 实在不行，可以将样品送到蛋白质组学分析检测中心，附带蛋白纯化要求。 |
6楼2013-09-25 10:44:27
chenzhengyi
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2楼2013-09-06 11:39:43
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