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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 天然药物化学 » 多糖的纯化问题，求高手解答~~
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tq5005

银虫 (小有名气)

[求助] 多糖的纯化问题，求高手解答~~

本人现在在做多糖的纯化，准备先用DEAE-52柱，再用sephadex G-200精制，问题是过柱子以后的多糖收集液需要先经过硫酸苯酚显色，才能在紫外上测定其浓度。而硫酸苯酚显色这个反应本身就不稳定，所以做出来的结果重现性会不太好，想请教各位，有没有其他更方便的办法可以代替硫酸苯酚显色，去检测每管收集液的多糖含量？
还有，是不是纯化实验一定要准确了解每管收集液的多糖浓度，我可否直接用硫酸苯酚显色，肉眼观察其是否变色，来判断管内是否含有多糖，然后合并含有多糖的收集管液呢？

期待高手的解答十分感谢！
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1楼 2013-09-04 09:21:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

重瓣栀子

木虫 (小有名气)
我做的时候都用苯酚硫酸显色后用酶标仪测吸光度，然后用吸光度来绘制洗脱曲线，再把峰的部位收集透析。曾经一根柱子上反复再生上样做了十次，每次的洗脱曲线都是差不多的。
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12楼2013-09-10 17:30:42
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sandy1233

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tq5005: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-09-05 14:40:03
xiaoxiao270: 金币+1 2013-09-05 17:35:33
你纯化的目的是什么：1、纯化出多糖混合物的有效部位；2、分离得到单个含量在95%以上的多糖进行结构测定。
如果目的是1，则需要测多糖的含量，将含量较高的部分合并，以得到多糖含量较高的有效部位
如果目的是2，则不需要测多糖的含量，需要薄层分析，将有相同斑点的馏分合并
不知道你多糖的结构，我分离得到的单糖和多糖都没有紫外吸收
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7楼2013-09-05 10:50:41
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tq5005

银虫 (小有名气)
非常感谢，纯化仪上确实连有紫外分析仪，不过我看到文献上是用苯酚浓硫酸显色后再来确定多糖的含量，不太了解紫外直接测定是否可行，所以想在这请教做过多糖纯化的朋友。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2013-09-04 16:23:13
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elsa2005

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by sandy1233 at 2013-09-05 10:50:41
你纯化的目的是什么：1、纯化出多糖混合物的有效部位；2、分离得到单个含量在95%以上的多糖进行结构测定。
如果目的是1，则需要测多糖的含量，将含量较高的部分合并，以得到多糖含量较高的有效部位
如果目的是2， ...

你好，为了进行结构测定的话，至少需要提取多少公斤？我的样品粗多糖的得率是6%。还有薄层用的是硅胶层析还是纸层析还是别的什么的？
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14楼2014-10-16 17:17:10
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普通回帖

-Drake-

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+1, 3u 2013-09-04 11:16:57
多糖的含量测定的确让人头疼，不稳定，要求每次操作条件基本一致，就连同一批不同瓶的硫酸对结果都有很大影响，但目前再也没什么更好的方法。
前面几瓶可以，后面收集到小容量瓶，还是得测
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2楼2013-09-04 09:47:50
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
PSA: 金币+1, 3u 2013-09-04 11:17:04
你如何从柱子上收集的？不用紫外分析仪收集吗？如果你采用紫外分析仪收集的话，多糖貌似可以用254nm的波长进行检测。
我建议你拿精制后的多糖，走一下紫外扫描，看最大吸收波长在哪个范围内。
然后在收集时用这个波长进行检测，收集峰，进行分析。
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3楼2013-09-04 10:12:35
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tq5005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by -Drake- at 2013-09-04 09:47:50
多糖的含量测定的确让人头疼，不稳定，要求每次操作条件基本一致，就连同一批不同瓶的硫酸对结果都有很大影响，但目前再也没什么更好的方法。
前面几瓶可以，后面收集到小容量瓶，还是得测

请问您说的前面几瓶不测，是为什么呢？谢谢
还有可否留下一个联系方式，以便日后请教o∩_∩o

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2013-09-04 16:25:50
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tq5005

银虫 (小有名气)
顶上去
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6楼2013-09-05 10:02:37
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502859345

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2013-09-05 17:35:37
单看反应颜色是不能判定多糖浓度的多少啊。。。。
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8楼2013-09-05 14:12:40
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tq5005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 502859345 at 2013-09-05 14:12:40
单看反应颜色是不能判定多糖浓度的多少啊。。。。

我主要是想合并有多糖的收集液
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9楼2013-09-05 14:39:16
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我就是liuxu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1 2013-09-05 17:35:41
直接观察颜色变化还是不太好吧 因为要是糖的含量小的话 貌似颜色和标准的查的不是很多 不是很容易看出来的吧 ~~嘿嘿
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人事做尽，再听天命
10楼2013-09-05 15:12:22
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