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engoy-vip

木虫 (小有名气)


[交流] 测多糖的分子量

有没有哪位朋友做过,用葡聚糖做标准品做,高效凝胶色谱测多糖的分子量的?这个葡聚糖标准品是选的多大分子量的? 价格上,是不是分子量越大的标准品越贵? 我的样品是植物多糖。
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叶文姣

新虫 (初入文坛)


★ ★
engoy-vip(金币+1): 谢谢参与
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流,欢迎常来 2012-09-14 06:55:13
hsd3521: 回帖置顶 2012-09-14 06:55:21
多糖的分子量与分子量分布测定法

药品名称 多糖的分子量与分子量分布测定法
类别 原料药
全文 多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法(中国药典1995年版二部附录ⅤD)测定。  1.对仪器的一般要求所用仪器为高效液相色谱仪。  色谱柱为测多糖专用凝胶柱,根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。  检测器为示差折光检测器单用,有时亦可与紫外检测器联用。  2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验,规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。  (1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]><2>   (2)K<[d]>=t<[R]>-t0/tT-t0   式中  W<[h/2]>为半峰宽;t<[R]>为供试品峰的保留时间,用于测柱效时,指葡萄糖峰的保留时间;t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间,一般指蓝色葡聚糖的保留时间;tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间,一般指葡萄糖的保留时间。  3.测定法  (1)系统校正 根据供试品分子量大小,一般选用5个已知分子量的多糖标准品(常用的为葡聚糖dextran),分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液,分别注入25μl标准品溶液,记录示差色谱图。  由GPC专用软件绘制标准曲线。  线性回归方程为:logM<[w]>=a+bRT式中  M<[w]>为标样的已知重均分子量;RT为标样的保留时间。  (2)样品测量 注入25μl供试品溶液,记录示差色谱图,分子量计算如下:  Mn=ΣRI<>/Σ(RI<>/M<>Mw=Σ(RI<>M<>/ΣRI<>D=Mw/Mn   式中  Mn为数均分子量;RIi为样品i级分的物质量,即示差色谱图的峰高;Mi为样品i级分的分子量,即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。  4.结果处理采用GPC专用软件,可获得样品归一化色谱图,微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。  根据供试品需要选择各项测定结果。
5楼2012-09-13 22:22:01
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普通回帖

396101466

金虫 (正式写手)



engoy-vip(金币+1): 谢谢参与
用电泳的方法就能检测多糖的分子量的
2楼2012-09-12 11:59:34
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engoy-vip

木虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 396101466 at 2012-09-12 11:59:34
用电泳的方法就能检测多糖的分子量的

这个事怎么做的?能具体说一下吗?
3楼2012-09-12 14:25:55
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396101466

金虫 (正式写手)


lovibond: 乱码 2012-09-13 08:31:06
具体的我没有???过,但是我们这边有人???,所以了解一些??你???以看看这个帖??:http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=2892734
4楼2012-09-12 14:36:51
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★ ★ ★
engoy-vip(金币+1): 谢谢参与
engoy-vip: 金币+2, Thank you 2012-09-16 14:48:38
葡聚糖表品的分子量不是越大越贵,而是越多越贵,如果你对你测定的分子量大概有数,可以选范围较小的标品,但如果是从来没有做过的,选取的范围则表较大。价格基本上五点以上的,都要千元左右,平均能做到15次左右,而8点的要1500元左右
6楼2012-09-14 19:56:17
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engoy-vip

木虫 (小有名气)


引用回帖:
6楼: Originally posted by liweixiaoye at 2012-09-14 19:56:17
葡聚糖表品的分子量不是越大越贵,而是越多越贵,如果你对你测定的分子量大概有数,可以选范围较小的标品,但如果是从来没有做过的,选取的范围则表较大。价格基本上五点以上的,都要千元左右,平均能做到15次左右, ...

想问一下,能用葡萄糖代替吗? 葡萄糖有不同分子量的吗?
7楼2012-09-16 14:49:43
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
葡萄糖是不行的的,因为葡萄糖是单糖,要测必须要标样
8楼2012-09-16 15:18:59
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wwzzxxhh

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
淀粉能做凝胶色谱吗?它溶于有机溶剂吗?
9楼2012-10-09 14:56:53
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