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engoy-vip

木虫 (小有名气)

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[交流] 测多糖的分子量

有没有哪位朋友做过，用葡聚糖做标准品做，高效凝胶色谱测多糖的分子量的？这个葡聚糖标准品是选的多大分子量的？价格上，是不是分子量越大的标准品越贵？我的样品是植物多糖。

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1楼2012-09-11 18:53:42

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叶文姣

新虫 (初入文坛)

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★ ★
engoy-vip(金币+1): 谢谢参与
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-09-14 06:55:13
hsd3521: 回帖置顶 2012-09-14 06:55:21

多糖的分子量与分子量分布测定法

药品名称多糖的分子量与分子量分布测定法
类别原料药
全文多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤＤ）测定。　　1.对仪器的一般要求所用仪器为高效液相色谱仪。　　色谱柱为测多糖专用凝胶柱，根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。　　检测器为示差折光检测器单用，有时亦可与紫外检测器联用。　　2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。　　(1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>

<2> 　　(2)K<[d]>=t<[R]>－t0/tT－t0 　　式中　　W<[h/2]>为半峰宽；t<[R]>为供试品峰的保留时间，用于测柱效时，指葡萄糖峰的保留时间；t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。　　3.测定法　　(1)系统校正　根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖dextran），分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，分别注入25μl标准品溶液，记录示差色谱图。　　由GPC专用软件绘制标准曲线。　　线性回归方程为：logM<[w]>＝a＋bRT式中　　M<[w]>为标样的已知重均分子量；RT为标样的保留时间。　　(2)样品测量　注入25μl供试品溶液，记录示差色谱图，分子量计算如下：　　Mn＝ΣRI<>/Σ(RI<>/M<>Mw＝Σ(RI<>M<>/ΣRI<>D＝Mw/Mn 　　式中　　Mn为数均分子量；RIi为样品i级分的物质量，即示差色谱图的峰高；Mi为样品i级分的分子量，即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。　　4.结果处理采用GPC专用软件，可获得样品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。　　根据供试品需要选择各项测定结果。