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测多糖的分子量
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| 有没有哪位朋友做过，用葡聚糖做标准品做，高效凝胶色谱测多糖的分子量的？这个葡聚糖标准品是选的多大分子量的？ 价格上，是不是分子量越大的标准品越贵？ 我的样品是植物多糖。 |
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3楼2012-09-12 14:25:55
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4楼2012-09-12 14:36:51
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engoy-vip(金币+1): 谢谢参与
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-09-14 06:55:13
hsd3521: 回帖置顶 2012-09-14 06:55:21
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hsd3521: 回帖置顶 2012-09-14 06:55:21
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多糖的分子量与分子量分布测定法 药品名称 多糖的分子量与分子量分布测定法 类别 原料药 全文 多糖的分子量与分子量分布是用高效液相色谱法（中国药典1995年版二部附录ⅤＤ）测定。 1.对仪器的一般要求所用仪器为高效液相色谱仪。 色谱柱为测多糖专用凝胶柱，根据所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶柱。 检测器为示差折光检测器单用，有时亦可与紫外检测器联用。 2.系统适用性试验按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数(n)和供试品在该分析状态下的分配系数(Kd)应达到规定的要求。 (1)n=5.54(t<[R]>/W<[h/2]>  <2> (2)K<[d]>=t<[R]>－t0/tT－t0 式中 W<[h/2]>为半峰宽；t<[R]>为供试品峰的保留时间，用于测柱效时，指葡萄糖峰的保留时间；t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间；tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。 3.测定法 (1)系统校正 根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖dextran），分别用流动相溶解制成每1ml中约含10mg的溶液，分别注入25μl标准品溶液，记录示差色谱图。 由GPC专用软件绘制标准曲线。 线性回归方程为：logM<[w]>＝a＋bRT式中 M<[w]>为标样的已知重均分子量；RT为标样的保留时间。 (2)样品测量 注入25μl供试品溶液，记录示差色谱图，分子量计算如下： Mn＝ΣRI<>/Σ(RI<>/M<>Mw＝Σ(RI<>M<>/ΣRI<>D＝Mw/Mn 式中 Mn为数均分子量；RIi为样品i级分的物质量，即示差色谱图的峰高；Mi为样品i级分的分子量，即示差色谱图I时间点代入标准曲线获得的分子量。 4.结果处理采用GPC专用软件，可获得样品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图,各时间点的分子量(片断数据)和各种平均分子量。 根据供试品需要选择各项测定结果。 |
5楼2012-09-13 22:22:01
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