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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求一管BL21（DE3）感受态，万分感激
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rhFGF21

银虫 (小有名气)

[求助] 求一管BL21（DE3）感受态，万分感激

求一管BL21（DE3）感受态，感受态就行，万分感激(可以交换)    黑龙江省哈尔滨市，十分着急，好心人应助一下
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1楼 2013-09-01 18:50:12
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yanfang2012

木虫 (著名写手)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-02 23:24:34
试剂公司可以直接定啊，不是很贵，这个要干冰运输的，除非同城的，不然应该没有人直接送一管给你
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believe yourself！
2楼2013-09-01 19:42:54
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)

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干嘛不自己做啊，很容易啊
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科学永无止境,只有合作共享才能更好地……
3楼2013-09-01 22:04:30
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pypsak

金虫 (正式写手)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-09-02 23:24:52
干冰运输费用就要上百，制备到是不贵，除非同城你自己带着干冰去拿，不然没人会送你的。自己买个菌株制备就是。
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4楼2013-09-02 09:01:11
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514278815

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-09-02 23:28:09
BL21菌株应该很好找的，贵校微生物实验室应该有保存的，感受态制备的方法已经很成熟，制起来也很简单的。
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5楼2013-09-02 10:49:55
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

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rhFGF21: 金币+1, ★有帮助 2013-09-02 11:55:32
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-02 23:28:17
可以做（没做过建议买，其实更省钱），而且买也很便宜的啊~身边实验室要一支也不难吧
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我会绕一个圈，走回到实验室
6楼2013-09-02 11:05:23
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)

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菌株给你就行了，感受态可不好运输哦
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7楼2013-09-02 22:12:47
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

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在试剂公司买一个更划算，我这里有，但路途遥远，运送成本太高
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自主创业者，捣腾生物试剂
8楼2013-09-03 22:05:54
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pengpeng7196

银虫 (小有名气)

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少量的制备，很简单，所用的东西保证无菌清洁，只需要小的冷冻离心机就可以做了，用不了多长时间的
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不断丰富自己
9楼2013-09-04 09:43:58
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)

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【转】感受态制备方法
基本上过程很简单：
1、从-80冰箱取出菌种，用接种环三区划线涂板，37度培养。
2、从培养了12-16个小时的平板上挑取单菌落，要分散比较好的单克隆，加0.5-1ml LB 37度摇菌6-8小时（也可12-16小时过夜摇）。
3、将小量的菌液转入大500ml三角烧瓶扩增培养。为保证通气良好，500ml三角烧瓶最多摇150ml菌液（100ml足以）。
4、扩增培养时注意将温度设为30度，稍低的温度有利于控制生长状态，不会摇过。
5、培养2小时之后测其OD值，接近0.3以后每20min测一次，在OD值达到0.3以后即可停止培养（可以用水作参比，LB培养基与水的OD值相差无几）。
6、在扩增培养同时制备0.1M CaCl2溶液。（1M CaCl2的母液用0.22um滤膜过滤后作为储存液，用时用灭菌水稀释十倍使用）
7、培养好的菌液立即置于冰上，旋转三角瓶，使其温度迅速冷却到0度。保持旋转状态10min。
8、4000rpm 4度 离心10min，弃去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入20mlCaCl2溶液，冰上震荡重悬。
9、4000rpm 4度 离心10min，弃去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入2 mlCaCl2溶液，冰上震荡重悬。
10、加入1/10体积的灭菌甘油。混匀后分装。

要注意的问题：
1、菌种要好，无污染。
2、所用的烧瓶、离心管应在使用前数天用去离子水充分浸泡，去除残留的各种离子。
3、扩增培养摇菌不能摇过。

好的感受态细胞对于分子实验非常重要，请牢记细节决定成败。祝你好运
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10楼2013-09-04 09:53:54
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