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rhFGF21

银虫 (小有名气)

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[求助] 求一管BL21（DE3）感受态，万分感激

求一管BL21（DE3）感受态，感受态就行，万分感激(可以交换) 黑龙江省哈尔滨市，十分着急，好心人应助一下

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1楼 2013-09-01 18:50:12

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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

【转】感受态制备方法
基本上过程很简单：
1、从-80冰箱取出菌种，用接种环三区划线涂板，37度培养。
2、从培养了12-16个小时的平板上挑取单菌落，要分散比较好的单克隆，加0.5-1ml LB 37度摇菌6-8小时（也可12-16小时过夜摇）。
3、将小量的菌液转入大500ml三角烧瓶扩增培养。为保证通气良好，500ml三角烧瓶最多摇150ml菌液（100ml足以）。
4、扩增培养时注意将温度设为30度，稍低的温度有利于控制生长状态，不会摇过。
5、培养2小时之后测其OD值，接近0.3以后每20min测一次，在OD值达到0.3以后即可停止培养（可以用水作参比，LB培养基与水的OD值相差无几）。
6、在扩增培养同时制备0.1M CaCl2溶液。（1M CaCl2的母液用0.22um滤膜过滤后作为储存液，用时用灭菌水稀释十倍使用）
7、培养好的菌液立即置于冰上，旋转三角瓶，使其温度迅速冷却到0度。保持旋转状态10min。
8、4000rpm 4度离心10min，弃去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入20mlCaCl2溶液，冰上震荡重悬。
9、4000rpm 4度离心10min，弃去上清，加入0.1M CaCl2溶液。每50ml菌液加入2 mlCaCl2溶液，冰上震荡重悬。
10、加入1/10体积的灭菌甘油。混匀后分装。

要注意的问题：
1、菌种要好，无污染。
2、所用的烧瓶、离心管应在使用前数天用去离子水充分浸泡，去除残留的各种离子。
3、扩增培养摇菌不能摇过。

好的感受态细胞对于分子实验非常重要，请牢记细节决定成败。祝你好运