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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 平板保存的菌再划线长不出来了
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jiyu

新虫 (初入文坛)

[求助] 平板保存的菌再划线长不出来了

大家好。我使用5月份4℃保存的黄杆菌平板（用来做PAH的生物降解），没长出来。就用液体培养基试了下。具体操作步骤是：
       1、将装有液体培养基（封口）的三角瓶直接放在无菌操作台上，开紫外灭菌30分钟。（以前师姐都是放入灭菌锅，我嫌耗时长，就偷了个懒，按理说紫外也可以杀菌哈。）
       2、然后将5月份的平板菌，挑了一环到液体里。放在水浴振荡器里培养。
      第3天培养液透明度降低，呈现黄色。我想着应该是长出来了。但是担心活性不够。就重复上述步骤。将培养液里的菌液重新接入新的培养液里继续振荡培养。但是今天是第3天，我发现新的三个转接瓶里，一个变成深绿色了（怀疑染菌！），其他两个的液面均出现白色的泡沫。求助：
1、这是否是染菌现象？
2、因为黄杆菌出现过平板传代不长菌，这说明菌已失活，我再用它在液体里长出来了。需要重复的用液体转接吗？还是说只要长出来了，就可以再接入平板？
3、我的操作步骤是否有问题？
因微生物知识欠缺，还请大家指点，感激不尽！
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1楼 2013-08-30 21:04:55
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-08-30 23:43:55
1、绝对染菌了！！！
培养基一定要采取高压灭菌，你隔着瓶子照照紫外是没用的。超净台里面的紫外灯只是能对直接照射到的台面和你瓶子的外表面起作用。而且整个操作过程中的枪头等也要高压灭菌！
2、一般菌种都是用20%的甘油保存在-80℃冰箱内，你在4度放了5个月不一定再用液体能摇起来。如果摇起来了，你就涂个板，看看平板上长起来的菌是不是你要的黄杆菌。
好在楼主最后说了自己微生物学知识欠缺，不然我不能相信学微生物的敢这样操作。。。。请注意无菌操作，还有听听你师姐的建议。
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3楼2013-08-30 22:06:49
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普通回帖

jiyu

新虫 (初入文坛)
补充，其他的两个最新最新转接的，还是呈现黄色不透明的，里面有一些白色的菌团样（不知道是什么），就是瓶壁一圈有白色泡沫。
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2楼2013-08-30 21:10:22
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jiyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小小亚杰 at 2013-08-30 22:06:49
1、绝对染菌了！！！
培养基一定要采取高压灭菌，你隔着瓶子照照紫外是没用的。超净台里面的紫外灯只是能对直接照射到的台面和你瓶子的外表面起作用。而且整个操作过程中的枪头等也要高压灭菌！
2、一般菌种都是用 ...

多谢你！以后再不偷懒了。：）如果说我把菌摇起来了，涂板可以涂出来，那这个菌是否还需要多用液体的转接其次类似活化，要怎么判断？
还有就是平板和试管斜面划线，有什么区别?
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4楼2013-08-31 10:23:17
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jiyu

新虫 (初入文坛)
这个菌种和其他的一株菌，师姐一直是用的试管转接，差不多每月就转一次，然后黄杆菌有一次转了之后就没长出来了。后来也是摇了下，长出来一颗点，就把这个点涂出来的菌，和另一株菌分别用甘油保存在了-70冰箱。请教下亚杰：
1、我当时-70保存的时候。是取了甘油80mL，生理盐水20mL，混匀后高温灭菌。取培养了1天的菌液5mL，加保存液2mL，装于保存管中。没有用液氮冻，直接放入-70冰箱。这个操作有误吗？
2、如果直接是用-70的菌，是直接取出来化了投进液体培养基中培养，还需要活化嘛？如何活化？
3、因为这个菌是用来降解污染物实验用的，短期的保存使用固体培养基可以不？
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5楼2013-08-31 10:47:19
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skull123

木虫 (正式写手)
我还是第一次看到这种做法



1、将装有液体培养基（封口）的三角瓶直接放在无菌操作台上，开紫外灭菌30分钟。
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6楼2013-08-31 14:50:08
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skull123

木虫 (正式写手)
4摄氏度保存菌种一般最好不要超过半个月的时间，有些菌一个星期都扛不了，，，，你弄的5月份的额，都过了3个多月了吧。。。。。。
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7楼2013-08-31 14:52:32
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任_强

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
师姐让做啥就做啥，师姐让咋做就咋做。微生物发酵不能偷懒的。你想想水里什么菌都有。你重新从平板里转吧
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微生物行业的初学者，望大牛们不吝赐教
8楼2013-08-31 15:03:17
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jiyu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 任_强 at 2013-08-31 15:03:17
师姐让做啥就做啥，师姐让咋做就咋做。微生物发酵不能偷懒的。你想想水里什么菌都有。你重新从平板里转吧

师姐毕业前菌就传代失败一次了。后面就丢给我了。呜呜
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9楼2013-08-31 15:09:54
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小小亚杰

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
jiyu: 金币+4, ★★★很有帮助, 太感谢binfongge了！ 2013-09-05 19:55:43
引用回帖:
5楼: Originally posted by jiyu at 2013-08-31 10:47:19
这个菌种和其他的一株菌，师姐一直是用的试管转接，差不多每月就转一次，然后黄杆菌有一次转了之后就没长出来了。后来也是摇了下，长出来一颗点，就把这个点涂出来的菌，和另一株菌分别用甘油保存在了-70冰箱。请教 ...

1、操作大体上是对的，一般甘油终浓度为20%即可。
我们通常配置40%的甘油，然后保存菌种时等体积加菌和甘油。不过你这样操作也是可行的。
2、-70保存的菌种投进液体培养基中培养，就是一次活化的过程，等菌长起来再去后续操作就行了。
我通常是从-70吸一点菌体出来摇菌或者涂平板，待其长起来进行后续操作。
3、短期保存，在平板上长起来，封好平板，放在4度可用2周左右。

补充一点，我对平板和试管斜面划线的区别不是很清楚，不过我通常同平板划线，感觉试管斜面更适合于保存菌种，就是麻烦一点。

还有这个菌是否还需要多用液体的转接其次类似活化，要根据菌的活性来说。一般的大肠杆菌就不用活化了，黄杆菌我不太了解。但你说这个菌种是用来降解污染物试验用，那么你将长起来的菌试着去处理一下污染物，如果有效就不用再活化了。
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10楼2013-09-01 21:34:58
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