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求助拟南芥SALK突变体纯合体鉴定中的问题
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我在鉴定SALK突变体纯合体过程中，发现以野生型的DNA为模板用LBb1+RP引物进行PCR的时候也能扩出同T-DNA插入突变体中相大小的条带，请教哪位高手给分析一下，为什么会这样，怎么解决此类问题？ 附件中的图为其中一次得结果，我分别用了三次提的Col DNA，结果都是一样的，请教高手解答，谢谢！  w122h2616138_1377696831_322.jpg |
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chenzhu198
铁杆木虫 (著名写手)
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3楼2013-08-30 19:33:24
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangxp518559: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-31 10:26:58
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wangxp518559: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-31 10:26:58
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根据你的描述和我的经验，其实这种结果已经可以基本判断了： SALK lines中的1,2,3,6,8为纯合突变体。 尽管野生型有相同大小的条带，但是条带明显比你的SALK突变体要若的多，说明其很有可能只是非特异条带。 有必要完善一下你的实验，方法有： 1. 提高LBb1+RP的退火温度（2-5度），你很可能发现，野生型的非特异带消失了； 2. 更换LBb1引物为LBa1或者LBb1.3，可能会有更好的结果。 祝顺利！ |
2楼2013-08-30 11:26:45
starseacow
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4楼2013-08-31 06:21:42